1. Днк бөліп алу Полимеразаны ставим на цепную реакцию(пцр)
жүктеу/скачать 16,83 Kb.
|
9 исс
- Бұл бет үшін навигация:
- ДНҚ-ны сандық анықтауға арналған дифениламин әдісі.
|
2. Полимеразаны ставим на цепную реакцию(ПЦР) 3. СЕКВЕНИРЛЕУ нуклеотидтердің орналасу ретін анықтаймыз Гельді дайындау үшін бізге агароза, буфер ТАЕ , Бромистый этидий, бромфенол краска, пипетка, камера для электрофореза, ток көзі, гельге арналған үстелше, таразы агарозаны дайындау үшін, трансиллюиминатор ультрафиолет көмегімен гельді қарау, микроволнрвка агарозды қыздыру үшін 1)Ең алдымен таразыны қосып аламыз 1г агарозды өлшейміз; колбаны алып сыртына агароза деп жазып аламыз, одан кейін ішіне 100мл ТАЕ буферін құямыз, агарозаны себеміз араластырамыз 2)колбаны микроволновкаға ерітінді толықтай прозрачный болу үшін қойып аламыз 30сек, қайнап кетпеуін қадағалау керекпіз, себебі концентрациясы өзгеріп кетуі мүмкін 3)бромистый этидий ерітіндісін 2-10мкл аралығында колбаның ішіндегі ерітіндіге қосамыз, тусі ашық ал-қызылға айналады 3)ерітіндіге арналған үстелшеге дайындаған колбадағы ерітінді құямыз, желе суып қатқанша күтеміз 3)үстелше ішіндегі гребенкаларды аламыз, оңайрақ болу үшін су тамшыларын енгіземіз 4)камераның ішіне үстелшеден гельді ауыстырамыз 5)1мкл бромфенол көк ерітіндісімен ДНҚны бояймыз 6)пипетка көмегімен боялған ДНҚ-ны камера ішіндегі ерітінді қалташаларға тамызамыз 7)тоқ көзіне қосамыз 110мА 15мин 8)процесс басталағаннан кейін көпіршіктер пайда болады, 3-4минуттан кейін теріс зарядты ДНҚ гельге қарай жылжып бастайды 9)камераны тоқ көзінен өшіреміз 10)камераның ішінен гельді алып, трансиллюиминаторға орналастырамыз 11)Трансиллюминаторды қосып қараймыз, ДНҚның жарық шашуын байқауға болады ДНҚ-ны сандық анықтауға арналған дифениламин әдісі. 1. Дифениламиннің мұздық сірке қышқылындағы ерітіндісін дайындаңыз (ерітіндінің барлық компоненттері зиянды заттар, атап айтқанда дифениламин, сондықтан реагентті ылғалдың астында дайындау керек) дайындалған ерітіндіні жарықтан қорғау үшін алюминий фольгаға оралған конустық колбаға салыңыз: 250 мл мұздай сірке қышқылын араластырыңыз қышқыл, 15,2 мл хлор қышқылы (43%) және 2 мл (16 мг / мл) ацетальдегид. 7,5 г димениламинді өлшеп (қолғаппен) өлшеп, ацетальдегид ерітіндісіне үлес қосып, барлық дифениламин ерігенше қоспаны шайқаңыз. Бұл ерітіндіні бөлме температурасында қараңғыда 6 апта сақтауға болады. Ерітіндісі бар колба немесе қышқыл ерітіндісі түтін сорғышында сақталуы керек. 2. Резервтің 0,1% ДНҚ ерітіндісін дайындаңыз, ондағы ДНҚ-ның мөлшерін спектрофотометрде 260 нм толқын ұзындығында өлшеңіз. Калибрлеу қисығын тұрғызу үшін қор ерітіндісінен 20-500 мкг / мл концентрациясы бар ДНҚ сұйылту сериясын дайындаңыз. 3. ДНҚ ерітіндісін дифениламин реактивімен 1: 10 қатынасында араластырыңыз. Үлгілерді 37 ° С температурада қараңғы жерде 16-20 сағат инкубациялау керек. бір рет қайта салынды. 4. Үлгілерді центрифугалаңыз (MPW-210 центрифуга, айн / мин 7000 айн / мин) 15 минут ішінде және оптикалықты анықтаңыз ерітінділердің тығыздығы 595 және 700 нм. Абсорбция айырымына калибрлеу қисығын салыңыз (абсорбция 595 және фон 700 нм аралығында). Зерттелетін үлгінің оптикалық тығыздығы калибрлеу қисығымен корреляцияланады және ерітіндідегі ДНҚ концентрациясы анықталады. 5. Қажет болса, нәтижені препараттың үлгісі үшін, препараттың құрғақ салмағы үшін немесе ондағы ақуыз құрамы үшін қайта есептеңіз. Әр түрлі соя протеиндеріндегі ДНҚ құрамын зерттеу: майсыз және майсыз соя ұны, дәстүрлі технология бойынша алынған соя протеинінің концентраты және соя изоляты 20 және 85 ° С температурада анықталған ДНҚ мөлшерінде айтарлықтай айырмашылықты анықтады, бұл термиялық өңдеу қажеттілігін көрсетеді үлгілер. Осылайша, әзірленген әдістер қойылған мақсаттарға сәйкес келеді және зертханалық тәжірибеде ДНҚ-ны сандық анықтауға ұсынылуы мүмкін. жүктеу/скачать 16,83 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|