8 Ақуызды зерттеудегі гель-электрофорез әдісі. Мақсаты. Физикалық негіздері

8) Ақуызды зерттеудегі гель-электрофорез әдісі. Мақсаты. Физикалық негіздері
Ақуызды электрофорезі-стационарлық электр өрісіндегі әртүрлі молекулалық салмақтағы зарядталған ақуыз макромолекулаларының қозғалысына негізделген ақуыз қоспасын фракцияларға немесе жеке ақуыздарға бөлу тәсілі. Ақуыз электрофорезі ақуыз қоспасының компоненттерін талдау үшін де, біртекті ақуыз алу үшін де қолданылады. Ақуыздарды электрофоретикалық талдаудың ең көп таралған нұсқасы Лэммли полиакриламидті гельдегі ақуыз электрофорезі. Полиакриламидті гельдегі ақуыздардың электрофорезі-полиакриламидті гельдегі ақуыз қоспаларын олардың электрофоретикалық қозғалғыштығына (полипептидтік тізбек ұзындығының немесе молекулалық массаның функциясы, сондай-ақ ақуыз молекуласының қатпарлануы, трансляциядан кейінгі модификациялар және басқа факторлар) сәйкес бөлу әдісі. Ақуыздар мен пептидтерді фракциялаудың бұл әдісі қазіргі молекулалық биологияда, биохимияда және генетикада кеңінен қолданылады. Мақсаты: Полиакриламидті гельдегі ақуыз электрофорезінің көптеген модификациялары әртүрлі тапсырмалар үшін және әртүрлі ақуыздар мен пептидтер үшін әзірленді. Ең көп таралған түрі Лэммли натрий додецилсульфатының қатысуымен полиакриламидті гельдегі ақуыздардың электрофорезі.
9) Ақуызды зерттеудегі секвенирлеу әдісі. Мақсаты. Физикалық негіздері. Әдістің принципі.
Ақуызды секвенирлеу - аминқышқылдарының тізбегін N-ұшынан 50-60 аминқышқылдарының қалдықтарына дейін анықтауға арналған жабдық. Аминқышқылдарының тізбегін анықтау Эдман әдісіне негізделген-пептидтердің бастапқы тізбегін (реттілігін) анықтаудың алғашқы әдістерінің бірі. Әдістің мәні зерттелетін пептидті реагенттердің белгілі бір жиынтығымен өңдеу болып табылады, бұл бір амин қышқылының тізбектің N-соңынан оның фенилтиогидантоин туындысы (Эдман реакциясы) түрінде бөлінуіне әкеледі. Фенилтиогидантоин туындыларын анықтау қысыммен сұйық хроматография арқылы жүзеге асырылады. Мақсаты: пептидті реагенттердің белгілі бір жиынтығымен өңдеу болып табылады, бұл бір амин қышқылының тізбектің N-соңынан оның фенилтиогидантоин туындысы (Эдман реакциясы) түрінде бөлінуіне әкеледі.