Н. Э. Баумана Кафедра терапии и клинической диагностики с рентгенологией Амиров Д. Р., Тамимдаров Б. Ф., Шагеева А. Р. Учебное пособие
жүктеу/скачать 2,36 Mb. Pdf көрінісі
|
Клиническая гематология животных
|
69 Рисунок 35. Мазок крови (окраска по Романовскому-Гимза): 1) эритроциты; 2) сегментоядерный нейтрофил; 3) палочкоядерный нейтрофил; 4) эозинофил; 5) базофил; 6) лимфоцит; 7) моноцит . При окрашивании необходимо соблюдать ряд требований: - вода должна иметь рН=6,6-6,8; посуда для разведения краски должна быть чистой; раствор краски готовится ех tempore , а не заранее; - краску следует добавлять по каплям, а не наливать сразу; - концентрация раствора не должна превышать три капли на 1мл; - рекомендуется дистиллированную воду оставлять на мазке после про- мывания в течении 1 мин. (для красивой дифференциальной окраски). Окрашенный препарат промывают струей дистиллированной воды и вы- сушивают на воздухе. Следует помнить, что краска, постоявшая на холоде или в сыром поме- щении, сильно портиться. Для ее восстановления рекомендуют поместить ее в водяную баню с температурой 60 0 на 15 мин. Модификация окраски мазков крови по Филипсону. Берется одна часть краски Романовского и 3 части этилового спирта. После смешивания краска пригодна сразу к употреблению. На нефиксированный мазок наносится 10-15 капель краски, через 10-15 минут наливается 0,5-1 мл дистиллированной воды, которая тщательно перемешивается с краской. Окрашивание мазка продолжа- ется 20-30 минут. Смывается дистиллированной водой и мазок высушивается на воздухе. Окраска по Лейшману. При этом способе применяют смесь азура 1, метиленового синего, водо- растворимого желтого эозина 0,2г на 10 мл метилового спирта. Продолжитель- ность фиксации неразбавленной краской 3-4 мин, а окраски с равным количест- вом воды 5-10 мин. 70 Окраска по Май-Грюнвальд. Окрашивание производиться готовым раствором краски Май-Грюнвальд. На нефиксированный мазок наносят 15-20 капель краски на 3 минуты. Затем на него наслаивают то же количество дистиллированной воды и докрашивают еще 15-20 минут. Затем смывается дистиллированной водой и мазок высушивается на воздухе. Окраска по Паппенгейму. Этот метод соединяет преимущества окраски по Май-Грюнвальду и Ро- мановскому-Гимза. Предварительной фиксации не требуется, как и при окраске по Лейшма- ну, а мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наливают 15-20 капель краски Май-Грюнвальд (раствор эозина и метиленовой синьки в метиловом спирте и глицерине) в течение 3 минут. Затем к ней осторожно при- ливают 15-20 капель усредненной дистиллированной воды и через 1 минуту жидкость удаляют вместе с бумагой. Тотчас же кладут мазком вниз в чашку Петри на стеклянные палочки и докрашивают по Романовскому-Гимза в тече- ние 15-30 минут. Этот способ дает наиболее рельефную окраску эритроцитов и лейкоцитов, резко оттеняя в то же время ядра лейкоцитов и зернистость цито- плазмы. Мазки пунктатов лимфатических узлов, селезенки принято окрашивать по Лейшману или по Паппенгейму. Окраска по Нохту. Для этой окраски составляют различные смеси 0,1%растворов азура2 и водорастворимого желтого эозина на дистиллированной воде, например: Вода дистиллированная 25-50-100-200-300мл Азур 2 13-26-52-100-156 Эозин водный 10-22-44-88-132 Окрашивание в течение 30-35 мин, а при появлении молодых форм крови - 20мин. Окраска выявляет специфику каждой клетки, дифференцирует ядро. Применяется для окраски мазков периферической крови и костномозговых пунктатов. Окраска толстой капли. Исследование в толстой капле проводится с целью подсчета эозинофилов и обнаружения кровопаразитов (особенно при подостро, хронически проте- кающих протозойных заболеваниях, когда просмотр обычно приготовленного мазка не дает должных результатов). 71 На предметное стекло наносится крупная капля крови и размазывается диаметром 1-2см. высушивается на воздухе в течение 20-30 мин. На высушенный и не фиксированный препарат наносится краска Рома- новского - Гимза. Краска гемолизирует эритроциты и, разлагаясь образует красное облачко на поверхности жидкости. Чтобы избежать выпадение осадка, раствор краски через 3 минуты осторожно сливают. Остатки первой порции смывают, приливая сбоку новой порции краски. Повторив эту манипуляцию, еще раз оставляют краску Романовского Гимза на стекле и окрашивают тол- стую каплю 20-30 минут. По истечении времени краску сливают, осторожно сполоснув дистиллированной водой (легкой струей(!), т.к. толстая капля, легко смывается), высушивают мазок. Перекрашенные препараты характеризуются грязнофиолетовым окраши- ванием (такое же окрашивание получают, если вода щелочной реакции). Пра- вильно окрашенные препараты имеют синеватую или голубоватую сердцевину с красновато-фиолетовыми краями. В правильно окрашенном мазке отчетливо выражены характерные осо- бенности каждой клетки, кровяные пластинки, разбросанные маленькими груп- пами по всему полю зрения, хорошо заметны в виде маленьких зернышек крас- новатого цвета. Кровепаразиты имеют хорошо окрашенную протоплазму, в го- лубой цвет и рубиново красное ядро. При плохом окрашивании капли, ядро клеток и зернистость протоплазмы плохо выражены, кровяные пластинки еле заметны. Эозинофилы подсчитывают отдельно, ввиду незначительного их содер- жания в периферической крови. Подсчет применяют в качестве контрольного метода, когда при подсчете формулы крови установлено полное отсутствие этих клеток (анэозинофилия). Для этого в разных точках толстой капли, под иммерсией, подсчитывают все расположенные в поле зрения лейкоциты, от- дельно отмечая эозинофилы. Закончив подсчет одного участка, передвигаются на противоположный участок препарата подобрав, таким образом несколько сот (200-400) лейкоцитов. Затем вычисляют процентное соотношение эозино- филов, например: На 300 лейкоцитов 15 эозинофилов На 100 лейкоцитов Х эозинофилов. Практически можно полученное количество эозинофилов разделить на первую цифру подсчитанных сотен: 2,3 или 4. В настоящее время также применяется способ быстрого дифференциро- ванного окрашивания биопрепаратов (кровь, эякулят, выпотные жидкости и др.). Например, использование набора лейкодиф (Рис. 36). 72 Рисунок 36. Набор "Лейкодиф" Набор содержит растворы для быстрого окрашивания мазков крови. Ок- рашивание проводят погружением в окрашивающие растворы мазков. Интен- сивность окрашивания возможно регулировать числом погружении в краси- тель. Набор состоит: 1. Фиксирующии раствор (200 мл): метанол 24 моль/л, нафталиновыи зе- леныи 1 мг/л 2. Окрашивающии раствор - 1 (200 мл): эозин У 1,73 ммоль/л, фосфатныи буфер, рН 6,8, 60 ммоль/л 3. Окрашивающии раствор - 2 (200 мл): АзурII 12 г/л, фосфатныи буфер, рН 6,8, 60 ммоль/л Таблетки для приготовления промывающего раствора : фосфатныи буфер, рН 7,2, 2,5 ммоль/табл. Приготовленные на обезжиренных стеклах мазки крови оставляют со- хнуть на воздухе. Растворы сливают в сосуды. Сначала мазок фиксируют погружением в реактив 1. После каждого по- гружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о краи со- суда. Затем фиксированныи мазок погружают в реактив 2. После каждого по- гружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о краи со- суда. После чего мазок погружают в реактив 3. После каждого погружения да- ют возможность стечь раствору и его избыток устраняют о краи сосуда. Стекла обрабатывают промывающим раствором и оставляют сушиться на воздухе. Но окрашивание не рекомендуется для исследования тромбоцитов. |