альфа-амилазаларды анықтау
(тұрақты
крахмал субстратын қолданатын жүйелі амилокластикалық әдіс). Қағидасы.
α-Амилаза бөлінген крахмалдарды гидролиздейді, оның нәтижесінде
бөлінген заттар йодпен әрекеттескенде, түстік реакцияға түспейді.
Анықтау тәсілі. Тәжірибелік сынақ: пробиркаға 0,5 мл субстрат-
буферлі ерітіндіні құйып, 37°С температурада 5 мин қыздырады. Оған 0,01
мл мөлшерде биологиялық сұйықтық қосылады. Сонан соң бөлме
температурасында 7,5 мин инкубациялайды. Суытылғаннан кейін 0,5 мл 0,1
йод ерітіндісі мен 5 мл дейін су қосады. Пайда болған тұнбаны қалыңдығы 1
см кюветке қойып, толқын ұзындығы 630—690 нм (жарық фильтрінің түсі -
қызыл) болатындай етіп даярлап ФЭК-те өлшейді. Бос сынақты тәжірибелік
сынақ ережелері бойынша өткізеді, бірақ биологиялық сұйықтықты
инкубациядан кейін йод ерітіндісімен бірге қосады. Өлшеуді де тәжірибелік
сынақтағыдай су қолданбай өлшейді. Есептеу.
37°С–де
инкубацияланған
1
л
биологиялық
сұйықтықта
гидролизденген α-амилазны миллиграмм, ал крахмалды грамм мөлшерінде
есептейді.
Есеп формула бойынша шығарылады. α-амилаза белсенділігі
,
мг/(с х л)
= (Е
1
- Е
2
/ Е
1
)х С х t х К,
Мұндағы Е
1
– бос сынақ экстинкциясы; Е
2
– тәжірибиелік топ
экстинкциясы; С – бос және тәжірибиелі сынаққа қолданылған крахмал саны
|
