Н. Э. Баумана Кафедра терапии и клинической диагностики с рентгенологией Амиров Д. Р., Тамимдаров Б. Ф., Шагеева А. Р. Учебное пособие



Pdf көрінісі
бет40/109
Дата09.03.2022
өлшемі2,36 Mb.
#134847
1   ...   36   37   38   39   40   41   42   43   ...   109
Байланысты:
Клиническая гематология животных

 


69 
 
Рисунок 35. Мазок крови (окраска по Романовскому-Гимза): 
1) эритроциты; 2) сегментоядерный нейтрофил; 3) палочкоядерный нейтрофил;
4) эозинофил; 5) базофил; 6) лимфоцит; 7) моноцит

 
При окрашивании необходимо соблюдать ряд требований:
- вода должна иметь рН=6,6-6,8; посуда для разведения краски должна 
быть чистой; раствор краски готовится 
ех tempore
, а не заранее
- краску следует добавлять по каплям, а не наливать сразу; 
- концентрация раствора не должна превышать три капли на 1мл; 
- рекомендуется дистиллированную воду оставлять на мазке после про-
мывания в течении 1 мин. (для красивой дифференциальной окраски). 
Окрашенный препарат промывают струей дистиллированной воды и вы-
сушивают на воздухе. 
Следует помнить, что краска, постоявшая на холоде или в сыром поме-
щении, сильно портиться. Для ее восстановления рекомендуют поместить ее в 
водяную баню с температурой 60

на 15 мин. 
Модификация окраски мазков крови по Филипсону. Берется одна часть 
краски Романовского и 3 части этилового спирта. После смешивания краска 
пригодна сразу к употреблению. На нефиксированный мазок наносится 10-15 
капель краски, через 10-15 минут наливается 0,5-1 мл дистиллированной воды, 
которая тщательно перемешивается с краской. Окрашивание мазка продолжа-
ется 20-30 минут. Смывается дистиллированной водой и мазок высушивается 
на воздухе. 
Окраска по Лейшману. 
При этом способе применяют смесь азура 1, метиленового синего, водо-
растворимого желтого эозина 0,2г на 10 мл метилового спирта. Продолжитель-
ность фиксации неразбавленной краской 3-4 мин, а окраски с равным количест-
вом воды 5-10 мин.


70 
Окраска по Май-Грюнвальд. 
Окрашивание производиться готовым раствором краски Май-Грюнвальд. 
На нефиксированный мазок наносят 15-20 капель краски на 3 минуты. Затем на 
него наслаивают то же количество дистиллированной воды и докрашивают еще 
15-20 минут. Затем смывается дистиллированной водой и мазок высушивается 
на воздухе. 
Окраска по Паппенгейму.
Этот метод соединяет преимущества окраски по Май-Грюнвальду и Ро-
мановскому-Гимза. 
Предварительной фиксации не требуется, как и при окраске по Лейшма-
ну, а мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наливают 
15-20 капель краски Май-Грюнвальд (раствор эозина и метиленовой синьки в 
метиловом спирте и глицерине) в течение 3 минут. Затем к ней осторожно при-
ливают 15-20 капель усредненной дистиллированной воды и через 1 минуту 
жидкость удаляют вместе с бумагой. Тотчас же кладут мазком вниз в чашку 
Петри на стеклянные палочки и докрашивают по Романовскому-Гимза в тече-
ние 15-30 минут. Этот способ дает наиболее рельефную окраску эритроцитов и 
лейкоцитов, резко оттеняя в то же время ядра лейкоцитов и зернистость цито-
плазмы. 
Мазки пунктатов лимфатических узлов, селезенки принято окрашивать 
по Лейшману или по Паппенгейму. 
Окраска по Нохту. 
Для этой окраски составляют различные смеси 0,1%растворов азура2 и 
водорастворимого желтого эозина на дистиллированной воде, например: 
Вода дистиллированная 25-50-100-200-300мл 
Азур 2 13-26-52-100-156 
Эозин водный 10-22-44-88-132 
Окрашивание в течение 30-35 мин, а при появлении молодых форм крови 
- 20мин. Окраска выявляет специфику каждой клетки, дифференцирует ядро. 
Применяется для окраски мазков периферической крови и костномозговых 
пунктатов. 
Окраска толстой капли. 
Исследование в толстой капле проводится с целью подсчета эозинофилов 
и обнаружения кровопаразитов (особенно при подостро, хронически проте-
кающих протозойных заболеваниях, когда просмотр обычно приготовленного 
мазка не дает должных результатов). 


71 
На предметное стекло наносится крупная капля крови и размазывается 
диаметром 1-2см. высушивается на воздухе в течение 20-30 мин. 
На высушенный и не фиксированный препарат наносится краска Рома-
новского - Гимза. Краска гемолизирует эритроциты и, разлагаясь образует 
красное облачко на поверхности жидкости. Чтобы избежать выпадение осадка, 
раствор краски через 3 минуты осторожно сливают. Остатки первой порции 
смывают, приливая сбоку новой порции краски. Повторив эту манипуляцию, 
еще раз оставляют краску Романовского Гимза на стекле и окрашивают тол-
стую каплю 20-30 минут. По истечении времени краску сливают, осторожно 
сполоснув дистиллированной водой (легкой струей(!), т.к. толстая капля, легко 
смывается), высушивают мазок. 
Перекрашенные препараты характеризуются грязнофиолетовым окраши-
ванием (такое же окрашивание получают, если вода щелочной реакции). Пра-
вильно окрашенные препараты имеют синеватую или голубоватую сердцевину 
с красновато-фиолетовыми краями. 
В правильно окрашенном мазке отчетливо выражены характерные осо-
бенности каждой клетки, кровяные пластинки, разбросанные маленькими груп-
пами по всему полю зрения, хорошо заметны в виде маленьких зернышек крас-
новатого цвета. Кровепаразиты имеют хорошо окрашенную протоплазму, в го-
лубой цвет и рубиново красное ядро. При плохом окрашивании капли, ядро 
клеток и зернистость протоплазмы плохо выражены, кровяные пластинки еле 
заметны.
Эозинофилы подсчитывают отдельно, ввиду незначительного их содер-
жания в периферической крови. Подсчет применяют в качестве контрольного 
метода, когда при подсчете формулы крови установлено полное отсутствие 
этих клеток (анэозинофилия). Для этого в разных точках толстой капли, под 
иммерсией, подсчитывают все расположенные в поле зрения лейкоциты, от-
дельно отмечая эозинофилы. Закончив подсчет одного участка, передвигаются 
на противоположный участок препарата подобрав, таким образом несколько 
сот (200-400) лейкоцитов. Затем вычисляют процентное соотношение эозино-
филов, например:
На 300 лейкоцитов 15 эозинофилов 
На 100 лейкоцитов Х эозинофилов. 
Практически можно полученное количество эозинофилов разделить на 
первую цифру подсчитанных сотен: 2,3 или 4. 
В настоящее время также применяется способ быстрого дифференциро-
ванного окрашивания биопрепаратов (кровь, эякулят, выпотные жидкости и 
др.). Например, использование набора лейкодиф (Рис. 36).


72 
Рисунок 36. Набор "Лейкодиф" 
Набор содержит растворы для быстрого окрашивания мазков крови. Ок-
рашивание проводят погружением в окрашивающие растворы мазков. Интен-
сивность окрашивания возможно регулировать числом погружении
в краси-
тель. Набор состоит:
1. Фиксирующии
раствор (200 мл): метанол 24 моль/л, нафталиновыи
зе-
леныи
1 мг/л 
2. Окрашивающии
раствор - 1 (200 мл): эозин У 1,73 ммоль/л, фосфатныи
буфер, рН 6,8, 60 ммоль/л 
3. Окрашивающии
раствор - 2 (200 мл): АзурII 12 г/л, фосфатныи
буфер, 
рН 6,8, 60 ммоль/л 
Таблетки для приготовления промывающего раствора

фосфатныи
буфер, 
рН 7,2, 2,5 ммоль/табл. 
Приготовленные на обезжиренных стеклах мазки крови оставляют со-
хнуть на воздухе. Растворы сливают в сосуды.
Сначала мазок фиксируют погружением в реактив 1. После каждого по-
гружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о краи
со-
суда. Затем фиксированныи
мазок погружают в реактив 2. После каждого по-
гружения дают возможность стечь раствору и его избыток устраняют о краи
со-
суда. После чего мазок погружают в реактив 3. После каждого погружения да-
ют возможность стечь раствору и его избыток устраняют о краи
сосуда. Стекла 
обрабатывают промывающим раствором и оставляют сушиться на воздухе. Но 
окрашивание не рекомендуется для исследования тромбоцитов. 


73 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   36   37   38   39   40   41   42   43   ...   109




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет