Некоторые методы молекулярной биологии Денис Ребриков Полимеразная цепная реакция



Дата21.01.2023
өлшемі4,91 Mb.
#166030
түріПрограмма
Байланысты:
8773c67

Некоторые методы молекулярной биологии

  • Денис Ребриков

Полимеразная цепная реакция

  • Принцип ПЦР сформулировал Гобинд Корана в 1971
  • В 1983 Кэри Мюллису удалось провести ПЦР
  • В 1993 за изобретение ПЦР Кэри Мюллису вручена Нобелевская премия по химии

Выявление патогенов

  • Инфекции крови (качественное и количественное определение)
  • ИППП
  • Эпидемические инфекции
  • Исследование биоценозов
  • и др. …

Исследование генома

  • ПЦР позволяет определять вставки, делеции или однонуклеотидные замены в геномной ДНК
  • Сейчас с помощью ПЦР диагностируют более 200 наследственных заболеваний, таких как:
    • Фенилкетонурия
    • Муковисцидоз
    • Миодистрофия Дюшенна/Беккера
    • Хорея Гентингтона
    • Гемофилия А, В
    • Болезнь Вильсона-Коновалова
    • и др. …

Исследование мРНК

  • Относительная экспрессия в двух образцах
  • Определение абсолютного кол-ва копий мРНК на клетку
  • контроль за использованием ГМ организмов (ГМО)
  • контроль за наличием и процентным содержанием ГМ ингредиентов (ГМИ) в пище
  • Определение вида и индивида
  • ПЦР позволяет осуществлять:
  • Мониторинг живых систем

Принцип ПЦР

Экспоненциальная амплификация

Программа амплификации

  • Денатурация ДНК
  • Отжиг праймеров
  • Достройка праймеров
  • Число циклов

Компоненты реакции

  • вода
  • буфер
  • dNTP
  • праймеры
  • полимераза
  • зонды, интеркаляторы
  • масло

Оборудование для ПЦР

«Проявка» хода реакции

  • Флуоресцентные красители и тушение флуоресценции
  • 5’-экзонуклеазная активность Taq-полимеразы
  • Гибридизационные методы
  • Меченые праймеры
  • Меченые зонды
  • Sunrise=Amplifluor™
  • Scorpions™
  • TaqMan
  • Beacons
  • kissing probes=
  • adjacent probes
  • Complementary oligos

Разгорание пробы

  • Принцип флуоресцентной детекции

Форма графиков накопления ДНК

Форма графиков накопления ДНК

  • начало быстрого падения Е
  • Е почти константа
  • Результаты ПЦР на образцах с одинаковым количеством ДНК

Вычитание геномов

  • Денис Ребриков

На Земле существует около 2,5 млн видов живых существ. Все это разнообразие определяют различия в строении геномов отдельных видов.

  • На Земле существует около 2,5 млн видов живых существ. Все это разнообразие определяют различия в строении геномов отдельных видов.
  • Организм человека состоит из примерно 210 основных типов клеток, существенно отличающихся фенотипически. Это разнообразие связано с различными вариантами экспрессии одного и того-же генома.

Сравнение кДНК для поиска дифференциально экспрессируемых генов

Сравнение бактериальных геномов для поиска штаммо-специфичных генов

Сравнение эукариотических геномов для поиска видо- и расаспецифичных последовательностей

  • ?

Для поиска дифференциально представленных молекул применяют методы вычитающей гибридизации

Принцип метода

  • Амплификации после SSH подвержены только молекулы с разными адаптерами

Эффективность применения SSH

  • Упрощение с варьирующими параметрами
  • Анализ на полиакриламидном геле
  • Стратегия дифференциального дисплея
  • Опухолевая трансформация
  • А
  • В
  • Выделение РНК
  • ~2 x104 видов мРНК
  • А
  • В

Использование УДД для поисков маркеров различных регионов тела планарии

  • 3c

Информация о компании ЗАО «НПФ ДНК-Технология»

  • Основана в 1993 году
  • Специализация: производство оборудования и реактивов для ПЦР, лабораторная диагностика
  • Состояние на январь 2007 года
    • более 170 сотрудников, из них 20 - кандидаты наук
    • собственная научная база для работ в области генной и белковой инженерии, синтеза олигонуклеотидов, секвенирования ДНК, разработки оборудования
    • собственное производство оборудования и диагностических наборов
    • диагностическая лаборатория для всех видов исследований


Достарыңызбен бөлісу:




©engime.org 2023
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет