Основные принципы систематики прокариот


Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)



бет22/95
Дата26.08.2022
өлшемі457,65 Kb.
#148267
1   ...   18   19   20   21   22   23   24   25   ...   95
Байланысты:
ответы к экзамену

Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
позволяет определить количество частиц фага в титруемом материале.

  1. Чашки с 20-25 мл МПА покрывают стерильной фильтровальной бумагой и подсушивают в термостате или под бактерицидной лампой (расстояние от лампы не более 2 м).

  2. Титруемый фаг разводят от 10-1 до 10-10 (как в предыдущем опыте) и по 1 мл переносят в другие пронумерованные пробирки (соответственно из 1-й в 1-ю и так далее до 10-й), в которые заранее наливают по 2,5 мл 0,7% МПА, расплавленного и остуженного до 45° С. В каждую из этих пробирок добавляют по 0,1 мл тест-культуры.

  3. Содержимое пробирок быстро перемешивают (не дать застыть агару) и выливают на поверхность среды в чашки Петри с номерами, соответствующими номерам пробирок. Через 30 мин чашки ставят в термостат.

  4. Учет результатов проводят через 18-20 ч. При большой концентрации фага (в первых чашках) произойдет сплошной лизис культуры. В тех разведениях фага, в которых находилось небольшое количество частиц фага, появятся изолированные колонии, которые подсчитывают.

Чтобы установить количество частиц фага в 1 мл фаголизата, пользуются формулой: n = y×x, где n - искомое число; y - количество выросших на чашке колоний фага; x - разведение фага в чашке, в которой подсчитаны колонии.
Например, если в чашке с разведением фага 10-8 (1:108) выросло 25 колоний, то в 1 мл исходной жидкости содержится 25×108 или 2,5×109частиц фага.


  1. Внехромосомные факторы наследственности.

Внехромосомные факторы наследственности бактерий представлены плазмидамивставочными последовательностями (Is-последовательности) и транспозонами. Все они образованы молекулами ДНК.
Плазмиды — фрагменты ДНК. Выделяют автономные (не связанные с хромосомой бактерии) и интегрированные (встроенные в хромосому) плазмиды.
Автономные плазмиды существуют в цитоплазме бактерий и способны самостоятельно репродуцироваться; в клетке может присутствовать несколько их копий.
Интегрированные плазмиды репродуцируются одновременно с бактериальной хромосомой. Интеграция плазмид происходит при наличии гомологичных последовательностей ДНК, при которых возможна рекомбинация хромосомной и плазмидной ДНК (что сближает их с профагами).
1   ...   18   19   20   21   22   23   24   25   ...   95




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет