Патологический материал направляют в лабораторию в сомнительных случаях. Для этого исследуют раневой воспалительный экссудат: пастеровской пипеткой высевают его в среду Китта-Тароцци (можно использовать также бульон и агар Мартена, казеиновые, рыбно-казеиновые среды). Посевы инкубируют в термостате 5—7 дней (срок накопления токсина). Полученную смешанную культуру фильтруют через асбестовые фильтровальные пластинки, фильтрат подкожно вводят белым мышам или морским свинкам. При наличии столбнячного токсина животные гибнут с выраженной клинической картиной столбняка. Параллельно (если необходимо) материал (экссудат) исследуют под микроскопом, а затем делают высевы на глюкозно-кровяной агар.
При исследовании выделяют возбудителя столбняка и его токсин.