Руководство Инфекционные болезни Главные редакторы акад. Ран н. Д. Ющук, акад. Раен ю. Я. Венгеров
жүктеу/скачать 31,6 Mb. Pdf көрінісі
|
ющук
| реакции иммобилизации,
которые используют для идентификации воз будителей, обладающих подвижностью. Этот лабораторный прием применяют в диагностике сифилиса (реакция иммобилизации трепонем), а также холеры (иммобилизация холерного вибриона). Еще один вариант — нейтрализация антителами сыворотки крови больного гемолитической активности стрептококкового стрептолизина-0 ( АСЛО ). Этот тест используется для диагностики инфекций, ассоциированных с гемолитическим стрептококком группы А. Аллергигеская проба. Для ее постановки человеку чаще всего внутрикожно вводится раствор микробных антигенов. Антигены взаимодействуют с эпители альными клетками в месте введения, что способствует выделению хемокинов и привлечению к месту введения аллергена различных клеток иммунного ответа и прежде всего Т-лимфоцитов. Т-лимфоциты, которые под воздействием микроб ных антигенов выделяют провоспалительные цитокины. Все это в совокупности в течение 48 ч дает основные проявления положительной аллергической реакции — лимфоидно-макрофагального инфильтрата в месте введения аллергена. 7 0 М ЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Аллергические пробы, хотя и носят лишь ориентировочный характер, очень удобны при массовых обследованиях на наличие таких инфекционных заболе ваний как туберкулез, бруцеллез, токсопламоз. В этих случаях положительная аллергическая проба указывает на инфицированность организма и необходимость более точной диагностики инфекционного процесса. К числу современных методов диагностики инфекционных заболеваний отно сятся мет оды им м уноанализа. Это особая группа методов, основанная на использовании меченых моноклональных антител. М оноклональны е ант ит ела получают с использованием так называемых гибридомных технологий, они высо ко специфичны, поскольку способны к взаимодействию только с одной наиболее характерной антигенной детерминантой среди всего набора видовых микробных антигенов. Моноклональные антитела обычно метятся с помощью красителей- флюорохромов. Такие антитела, присоединяясь к специфичному для них объ екту — искомому микроорганизму в составе биологического материала, вызы вают его свечение в ультрафиолетовом свете, что может быть зарегистрировано, например, с помощью люминесцентного микроскопа. Этот способ обнаружения микробных возбудителей получил названия прямого иммуноф луоресцент ного анализа (РИФ). Этот способ используется не только для обнаружения возбудителей в составе мате риала от больного, но и для выявления антител к возбудителю в сыворотке крови (серодиагностика). В последнем случае убитую культуру возбудителя обрабатывают сывороткой больного с последующим добавлением в систему меченных флюорохро мом антител к IgG человека. Наблюдаемое в последующем свечение микроорганизма говорит о возникновении сложного иммунного комплекса — микроб + антитела из сыворотки больного класса IgG + люминесцирующие анти-IgG МКАТ. Такую реак цию называют реакцией непрямой иммунофлюоресцепнции ( РНИФ ). Другой способ иммуноанализа — р а д и о и м м у н н ы й анализ. Он осно ван на использовании моноклональных антител, меченных радиоизотопом. Присоединение таких антител к специфичному им объекту, придает последнему радиоактивность, что может быть определено с помощью специальных приборов. Наконец, еще один высоко перспективный способ мечения моноклональных антител — с помощью фермента. В качестве последнего чаще всего используют рас тительный фермент — пероксидазу хрена. Обработка изучаемого объекта такими антителами требует последующего нанесения «хромогена» — субстрата для фермен та, меняющего цвет при образовании перекиси. В результате объект для специфи ческого присоединения меченых антител приобретает окрашивание, которое может быть зарегистрировано спектрофотометром, а метод получил название ИФА. ИФА, как и описанный выше иммунофлуоресцентный анализ, можно воспро изводить в виде прямого (выявление антигенов возбудителя в биологическом материале) и непрямого (выяваление антител в сыворотке больного) методов. В конечном итоге с помощью ИФА можно обнаруживать микроорганизмы в мате риале от больного, противомикробные антитела и антитела к другим веществам антигенной природы. С введением в клиническую практику методов иммуноанализа и, в первую очередь, аппаратного ИФА, диагностические возможности врача-инфекциониста значительно возросли. Особенно это касается серодиагностики, поскольку появи лась возможность устанавливать не только наличие антител к тому или иному воз будителю в сыворотке крови больного, но и определять принадлежность антител к тому или иному классу иммуноглобулинов, что повышает качество диагностики инфекционного заболевания. Дело в том, что антитела, принадлежащие разным классам иммуноглобулинов, выполняют различные функции (рис. 6.12). Так, например, известно, что первый контакт человека с тем или иным возбу дителем приводит к выработки IgM-ант ит ел, которая продолжается в течение примерно одного месяца. Эти антитела имеют большую молекулярную массу и не ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ 7 1 ГЛ А ВА 6 |