Сбор микроводорослей в природе и получение альгологически чистых популяций

Сухой вес клеток суспензии определяется следующим образом.

20-40 см³ суспензии водорослей центрифугируют в течение 10 мин при 3000-4000 об/мин. Центрифужную жидкость осторожно сливают, а центрифужный стакан с осадком добавляют в два приема 20-40 см³ водопроводной воды при тщательном перемешивании осадка и снова центрифугируют. Затем жидкость сливают, а осадок при помощи небольших порций дистиллированной воды переносят в бюксы, предварительно доведенные до достаточного веса.

Бюксы с осадком ставят в сушильный шкаф при постоянной температуре, выбранной в пределах от 80 до 105⁰, и доводят до постоянного веса. Расчет сухого вещества ведут в мг на 1 мл суспензии или на 1 млн. клеток.

(бихроматный метод)

Для определения органического вещества берут суспензию водорослей в количестве 1-2 см³ с таким расчетом, чтобы в 1 см³ содержалось от 5 до 25 млн. клеток хлореллы, добавляют 5 см³ хромовой смеси.

В качестве контроля берут 1-2 см³ среды и также добавляют 5 см³ K₂Cr₂O₇. Все пробы помещают в кипящую водяную баню. После охлаждения содержимое пробирок или кол-бочек количественно переносят в конические колбы на 250 мл. К жидкости добавляют 0,5 г KJ, 50-70 см³ дистиллированной воды и несколько капель крахмала.

Титруют 0,02 N гипосульфитов.

По разнице холостого и опытного титрования определяют количество кислорода, необходимого для окисления органического вещества.

где х – количество гипосульфита в мл, пошедшее на титрование контроля; х₁ – количество гипосульфита мл, пошедшее на титрование хромовой смеси в пробе после сжигания органического вещества; k – поправка гипосульфита; 0,16 – количество кислорода, соответствующее 1 мл 0,02 N раствора гипосульфита; 0.8 – коэффициент пересчета на органическое вещество, 2 – см³ суспензии.

Реактивы для определения: хромовая смесь (0,1 N раствора K₂Сr₂O₇ в концентрированной H₂SO₄)³ раствор гипосульфита (0,02 N); крахмал (индикатор).
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ФОТОСИНТЕЗА МЕТОДОМ ВИНКЛЕРА
Метод основан на связывания в щелочной среде растворившегося в воде кислорода, выделенного в процессе фотосинтеза растений, с последующим окислением эквивалентного связанному кислороду количество йодистого калия (в кислой среде) и оттитровыванием свободного йода гипосульфитом.
Последовательность работы при определении кислорода по Винклеру

Необходимые реактивы: гипосульфит 0,02 N; 0,5%-ный раствор крахмала; раствор хлористого марганца (50 г MnCl₂*4H₂O растворить в 100 мл воды, причем MnCl₂ не должен содержать железа); раствор NaOH+KJ (33 г NaOH растворить в 100 мл воды, если раствор мутный , отфильтровать еге через стеклянную вату, затем добавить 20 г KJ; раствора хранить в темном месте); чистая концентрированная H₂SO₄.

Приготовление среды. Для определения кислорода берется свежепреготовленная среда того же состава, какая использоваось для выращивания культуры. Среда готовится на све-жепрокипяченной воде, имеющей такую же температуру, какая будет во время экспозиции на свету.

Приготовление суспензии. К приготовленной седе добавляют такое количество суспензии водорослей, чтобы плотность клеток для экспозиции была равной 0,5 – 1 млн/мл. В сравнительных опытах важно готовить суспензию культур с плотностями, незначительно отличающимися одна от другой для видов с близким размером клеток, а в случае резкой разницы в размерах (Scenedesmus и Chlorella) расчет удобнее вести на одно и то же количество органического вещества.

Подготовка суспензии для экспозиции. Суспензию наливают

При притирании пробок надо следить, чтобы в склянках не оставалось пузырьков воздуха. Каждый вариант опыта ставится в трех повторностях. Параллельно в тех же условиях ставятся контрольные склянки (чистая питательная седа) в четырех повторностях.

Экспозиция. Все склянки на 2 часа помещают в термостат с охлаждением, в котором установлена 500 вт лампа накаливания. Склянка располагаются под лампой по кругу так, чтобы освещение было равномерным и приблизительно равным 8 – 10 тыс люкс. Температура на поверхности склянок должна быть одинаковой для всех видов (26 - 28⁰).

После экспозиции в каждую склянку добавляют последовательно 1 мл NaOH+KJ и 1 мл MnCl₂. При внесении раствора пипетку следует опускать до дна склянки и быстро вынимать с таким расчетом, чтобы за время поднятия 1 мл раствора был внесен в склянку. Склянки снова закрывают пробками, и содержимое их тщательно взбалтывают. После этого склянки ставят в темноту на , - часа для созревания осадка.

При сравнительных определениях склянки в таком виде можно оставлять на ночь и титрование проводить на следующий день.

Титрование. Перед титрованием в каждую склянку добавляют по мл концент-рированной H₂SO₄. Содержимое тщательно взбалтывают до полного растворения осадка. Затем берут 50 см³ жидкости и титруют 0,02 N гипосульфитов до появления слабо желтой окраски, после чего добавляют 1 см³ крахмала, и жидкость дотитровывается до полного исчезновения синей окраски.

где х - мл 0,02 N гипосульфита, пошедшего на титрование пробы опытного варианта; х₁ – мл 0,02 N гипосульфита, пошедшего на титрование контроля; k – поправка гипосульфита; 0,16 – количество кислорода, эквивалентное 1 мл 0,02 N гипосульфита; - количество кислорода в мл, выделенное 1 см³ суспензии за время экспозиции.