Инструкция по применению Учреждения-разработчики: Республиканская станция переливания

18

фиксируются на эритроцитах донора. После инкубации в пробирку  

№ 2 добавить доверху изотонический раствор хлорида натрия, содер-

жимое пробирки перемешать, центрифугировать и удалить отмыв-

ную жидкость. Такое отмывание эритроцитов повторить 3–4 раза. К 

осадку отмытых эритроцитов добавить 3–4 капли изотонического 

раствора хлорида натрия для получения приблизительно 5% взвеси. 

Одну каплю 5% взвеси эритроцитов перенести на белую пластинку, 

добавить по одной капле антиглобулиновой сыворотки. Сыворотку 

перемешать с эритроцитами и наблюдать результат реакции при по-

качивании пластинки в течение 20 мин. При несовместимости по 

резус-фактору  агглютинация  обычно  наступает  в  течение  первой 

минуты. Однако при низком титре резус-антител (или других анти-

тел) агглютинация может наступить позже.

Трактовка результатов: если наблюдается агглютинация эритро-

цитов (агглютинаты видны в виде комочков на просветленном или 

полностью  обесцвеченном  фоне),  это  указывает  на  то,  что  кровь 

донора несовместима с кровью реципиента и не может быть ему 

перелита. Если взвесь эритроцитов осталась гомогенно окрашен-

ной, без признаков агглютинации, это значит, что кровь больного 

не содержит неполных антител к эритроцитам донора в отношении 

резус-фактора  и  других  аллоантигенов,  к  которым  могли  образо-

ваться антитела неполной формы. Непрямая проба Кумбса является 

чувствительной только в отношении неполных антител.

5. Универсальная проба на индивидуальную совместимость 

крови донора и реципиента.

Проба  на  индивидуальную  совместимость  сыворотки  реципи-

ента  с  эритроцитами  предполагаемого  донора  является  наиболее 

надежным  способом  выявления  антител,  способных  вызвать  по-

вреждение перелитых эритроцитов и посттрансфузионные реакции 

(гемолитические). Проведение такой пробы позволяет:

– определить АВ0-совместимость донора и реципиента;

–  выявить  практически  все  антитела  в  сыворотке  реципиента, 

направленные против эритроцитов донора.

Во всех случаях, кроме срочных трансфузий, проба проводится 

в 2 этапа: первый — без использования антиглобулинового реаген-

та, второй — с антиглобулиновым реагентом или с использованием 

19

раствора желатина. В случае использования желатина метод менее 

чувствителен.

Первый этап: поместить 2 капли сыворотки реципиента в мар-

кированную пробирку, добавить 1 каплю 3% взвеси трижды отмы-

тых эритроцитов донора в изотоническом растворе хлорида натрия 

(фиксация  антител  происходит  лучше  в  растворе  низкой  ионной 

силы  —  LISS,  поэтому  предпочтительнее  взвесить  эритроциты  в 

растворе LISS, обычно поставляемом изготовителем вместе с анти-

глобулиновым  реагентом).  Немедленно  центрифугировать  при  

2000 об./мин в течение 20–30 с. Просмотреть супернатант на нали-

чие гемолиза, мягко покачивая пробирку отделить клеточный оса-

док от дна пробирки и определить наличие агглютинатов. Наличие 

гемолиза и/или агглютинатов на этой стадии может означать несов-

местимость по системе АВ0, либо присутствие в сыворотке реци-

пиента полных холодовых антител не АВ0 специфичности (анти-S, 

анти-Р1, анти-М, анти-N и др.).

Второй  этап  —  проба  с  антиглобулиновым  реагентом.  Если 

гемолиз  отсутствовал,  а  после  встряхивания  пробирки  эритро-

циты  образовали  гомогенную  суспензию,  следует  инкубировать 

пробирку  в  течение  30–45  мин  (при  использовании  LISS  время 

инкубации составляет 10–15 мин) при 37° С. Центрифугировать 

пробирку при 2000 об./мин в течение 20–30 с и просмотреть су-

пернатант на наличие гемолиза и агглютинатов. Наличие гемоли-

за  и/или  агглютинатов  (после  встряхивания  пробирки)  говорит 

о  присутствии  у  реципиента  полных  тепловых  антител  против 

эритроцитов донора.

Если гемолиз и агглютинация отсутствуют, следует провести от-

мывание эритроцитов 3–4 раза большим объемом (не менее 5 мл) в 

изотоническом растворе хлорида натрия (недостаточное отмывание 

может привести к инактивации антиглобулинового реагента и лож-

ноотрицательному  результату  теста,  поскольку  сыворотка  даже  в 

разведении 1:4000 инактивирует равный объем антиглобулиново-

го реагента). Добавить 1–2 капли антиглобулиновой сыворотки и 

тщательно перемешать. Центрифугировать пробирку, как указано 

выше, мягко разбить осадок и просмотреть пробирку на наличие 

агглютинатов.

20

Оценка результатов: кровь донора считается совместимой, если 

ни  на  одной  стадии  пробы  на  индивидуальную  совместимость  с 

кровью реципиента не наблюдается ни гемолиза, ни агглютинации. 

Агглютинация свидетельствует о наличии аллоантител в сыворотке 

реципиента, специфичность которых может быть выявлена в спе-

циальной  серологической  лаборатории  исследованием  с  панелью 

типированных эритроцитов. Такие реципиенты нуждаются в спе-

циальном подборе донора.

Качество антиглобулинового реагента гарантируется изготови-

телем. Реагент с истекшим сроком годности или после повторного 

замораживания (оттаивания) использованию не подлежит. С це-

лью контроля (если возникли сомнения в качестве реагента) сле-

дует  провести  антиглобулиновый  тест  с  резус-положительными 

эритроцитами, сенсибилизированными неполными анти-D анти-

телами. 

жүктеу/скачать 0,65 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: