Клональды микро көбейту

Сонымен қатар, мата мәдениеті әдісімен өсімдіктерді көбейту зертханасы дәстүрлі өндіріспен салыстырғанда үлкен инвестицияларды және сәйкесінше үлкен шығындарды талап етеді. Қаржылық шығындардың көп бөлігі жалақы қорына тиесілі. Сонымен қатар, қызметкерлер микробиологияның стандартты әдістеріне ие болуы керек және жұмыс жүргізілетін Өсімдіктер биологиясы саласында да, олардың in vitro мінез-құлқында да жеткілікті білімі болуы керек. Бұл өсірілетін өсімдіктерге дұрыс күтім жасау және жақсы нәтижеге қол жеткізу үшін қажет. Еңбекті дұрыс ұйымдастыру барлық уақытты қажет ететін операцияларды азайтуға мүмкіндік береді, бірақ соған қарамастан, барлық артықшылықтары бар түпкілікті өнім қымбатқа түседі.

Қолайлы жағдайларда және тиісті реактивтер болған кезде кез-келген өсімдікті in vitro-да өсіруге болатын сияқты, бірақ қазіргі уақытта өсімдік түрлерінің аз ғана бөлігі осы әдіспен тиімді таралады. Әлі күнге дейін көптеген шаруашылық-бағалы түрлерін қиын немесе мүмкін емес тудыруы жаңаруын немесе білім тамыры. Өсімдіктерді өсіру кезінде өсімдіктің құрылымын, өмірлік циклін және биохимиясын ескере отырып, жүйелі тәсіл қолданылады, дегенмен әдістер негізінен эмпирикалық болып қалады. Негізгі дақылдар үшін IN vitro өсіру уақыты мен шығындары өтелуі мүмкін, бірақ көптеген сәндік және басқа өсімдіктер үшін мұндай көбею технологиясы жеңілдетілгенге дейін үнемді бола алмайды.

Клондық микропроцессордың техникалық қиындықтары. Өсіру процесінде көптеген өсімдіктер фенолдық заттардың артық мөлшерін шығарады, олардың тотығу өнімдері тіндер мен мәдени ортаның қараңғылануына әкеліп соқтырмайды, сонымен қатар өсуді тежейді. Егер бұл бастапқы экспланттың реакциясына байланысты болса, оны аскорбин немесе лимон қышқылымен емдеу арқылы болдырмауға болады. Микроклондардың өсуі мен регенерациясы культуралық ортаға ингибиторлық заттардың шығарылуына ықпал ететін белсендірілген көмір қосу арқылы жақсарады. Өкінішке орай, белсендірілген көмір гормондар мен басқа заттарды байланыстырады, бұл оны in vitro қолдану аясын тарылтады.

Кейде өсімдіктерді өсіру кезінде ісінген, бұралған жапырақтар дамиды, олар қайтымсыз мөлдір және некротикалық болады, бұл қашу өліміне әкелуі мүмкін. "Суды сіңіру" деп аталатын және "витрификация" деп сипатталған бұл құбылыс цитокининдері бар ортада өсетін көшеттерде пайда болады. Витрификацияны гормондардың концентрациясын төмендету арқылы болдырмауға болады. Сондықтан, витрификацияға бейім қарақұмық сызықтарын клондау үшін қоршаған ортаны цитокининдермен және гормоналды емес ортамен алмастыру қолданылады (3-5 өту арқылы). Кейбір зерттеушілердің пікірінше, витрификацияның басты себебі-қоршаған ортаның жоғары су әлеуеті. Оны азайту үшін қоршаған ортадағы агардың концентрациясы жиі артады, ал көбею коэффициентінің төмендеуі қоршаған ортаға бір уақытта үш цитокининді – кинетинді, BAP және зеатинді енгізу арқылы өтеледі. Кеверс гипотезасы бойынша, витрификация-бұл мәдени ортада артық болатын аммоний иондары, цитокининдер және этилен тудыратын стресске жауап. Витрификацияны, осы автордың пікірінше, ыдыстардағы газ алмасудың жақсаруымен және аммоний иондары мен цитокининдердің концентрациясы бақыланатын айналымдағы сұйық ортаны қолданумен жеңуге болады. Биологиялық зерттеулер көрсеткендей, витрификацияланған жапырақтарда ФАЛ (фенилаланинаммиаклиаза) және қышқыл пероксидазалардың белсенділігі төмендейді, негізгі пероксидазалардың белсенділігі артады, бұл лигнификацияның төмендеуіне әкеледі. Нысандардың алуан түрлілігімен байланысты гипотезалардың әртүрлілігі витрификацияның себептерін түсінуде әлі де айқын емес екенін көрсетеді, сондықтан онымен күресу әдістері эмпирикалық сипатқа ие. In vitro әдістерін қолданатын зертханаларда үнемі кездесетін қиындық-баяу өсетін және көбінесе көзге көрінбейтін бактериялармен дақылдарды жұқтыру. Олар дамып келе жатқан өсінділерге нақты әсер етпеуі мүмкін, бірақ өсімдіктердің өміршеңдігі және тамырлардың кейінгі қалыптасуы жиі басылады. Микроорганизмдердің көпшілігі бастапқы материалды зарарсыздандырғаннан кейін сақталған сапрофиттер. Мұндай инфекцияны артық ылғалсыз өсетін таза бастапқы материалды қолдану арқылы азайтуға болады. Өсімдік тіндерінің ішінде өмір сүретін бактериялар анағұрлым маңызды проблема болып табылады, өйткені оларды әдеттегі зарарсыздандыру әдістерімен алып тастау қиын.

Кейбір сәндік өсімдіктердің өнеркәсіптік мәдени тіндерінің ластануы көптеген бақша өсімдіктерінің қоздырғышы – Ervinia carotova тудырады. Бұл бактериялардың тіндік мәдениетте болуы дәстүрлі өнеркәсіптік өндірісте осы қоздырғыштарға сезімтал емес өсімдіктердің өміршеңдігі мен хлорозының төмендеуіне әкеледі. Қосымша сақтық шаралары экспланттарды қоздырғышсыз өсімдік бөліктерінен оқшаулауды қамтиды (апикальды меристема). Өсіру процесінде донор өсімдіктерді сауықтыру үшін жоғары және төмен температура, антибиотиктер қолданылады. Тіпті бұл жағдайда да анықтау үшін сенімді тестілеу әдістерін қолдану маңызды мүмкін инфекцияны анықтау.