Флюорисцентный анализ – дает возможность исследовать подвижность фосфолипидных молекул в мембране, оценить вязкость липидной фазы мембраны. Микровязкость мембраны можно оценить по изменениям спектров флюоресценции, а также по степени поляризации Р – флюоресцентного излучения при освещении мембраны поляризованным светом. Связь степени поляризации Р и микровязкости мембраны - выражается формулой Перрена-Яблонского:
,
Где Р◦ - степень поляризации света на неподвижных молекулах,
R = 8,81 Дж/к·моль, Т, V – молярный объем флюорисцирующих молекул,
- время жизни возбужденного состояния.
Найдены полные сведения об агрегатном состоянии липидных бислоев засчет методы резкоспектроскопии ЭПР и ЯМР.
Электронный парамагнитный резонанс (ЭПР) – это явление резкого возрастания поглощения энергии электромагнитной волны системой парамагнитных частиц помещенных во внешнее магнитное поле, при резонансной частоте волны
Резонансное значение частоты
=
h – постоянная Планка,
- гидромагнитное отношение или - фактор , зависящий от природы парамагнитных частиц. Для свободного электрона =2. Магистон Бора =0,927·10-23Дж/Тл. Практически удобнее оставлять частоту ЭМ-ой волны постоянной, а медленно менять индукцию м.п. – В.
Резонансное поглощение энергии будет наблюдаться при
В ЭПР используются частоты ЭМ-го поля =1010Гц и индукция В=0,3Тл. Спектром ЭПР называется зависимость мощности поглощения Р ЭМ. волны от величины магнитной индукции В.
Чем сильнее взаимодействие между атомами и молекулами образца, тем спектры ЭПР шире. Чем слабее взаимодействие между частицы (больше подвижность молекулы), тем уже спектры ЭПР. По ширине спектров ЭПР можно судить о подвижности молекул вещества. Т.к. молекулы фосфолипидов диамагнитны, для ЭПР – исследований биомембран используются спин-зонды и спин-метки – молекулы или молекулярные группы с неспаренными электронами.
Несмотря на ценную информацию, этот метод (ЯПР) обладает существенным недостатком – внесение в биологический объект чужеродных молекул-зондов может изменять структуру объекта. От этого недостатка свободен метод ЯМР.
Достарыңызбен бөлісу: |