ДНҚ-ны тұндыру үшін этанолды қолдануға негізделген ДНҚ экстракциясының дәстүрлі әдістері ДНҚ-мен бірге полисахаридтердің тұнбасын тудырады. Сондықтан зерттеушілер фенол-хлороформ әдістерін қолданғанды жөн көреді . Алайда, бұл жағдайда ПТР ингибиторларының толық алынбауына байланысты оқшауланған ДНҚ-ның сапасы сәйкес келмеуі мүмкін.
ДНҚ-ны өсімдіктерден бөліп алуға арналған CTAB әдісі
СТАВ буфері: 2% CTAB (10,0 г), 1,4 M NaCI (40,91 г), 20 mM EDTA (20 ml 0,5 M EDTA), 100 mM Tris-HCI pH 8 (50 ml 1M) Tris-HCI) тазартылған су соңғы 500 мл көлеміне дейін қосылған болуы қажет.
TE буфері: 10 мМ Tris-HC1, рН 8,0; 1 мм EDTA. 2-8 ° C температурада сақталған.
ӘДІСТІҢ ЖҮРУ КЕЗЕҢДЕРІ
1,5 мл түтікке шамамен 2 см2 жапырақ салады. (Пробиркаға парақ салып, қақпақты басу арқылы екі немесе үш шеңберді қысып алуға болады).
400 мL CTAB буферін қосып, тез арада 30 секунд ішінде ұсақтағыш таяқшамен ұсақтау қажет.
5 минут ішінде максималды жылдамдықпен центрифугалайды(13000 айн / мин).
Спиртті ағызып, ДНҚ-ны кептіру үшін ашық түтікке қалдыру керек (көбіне 1 сағат жеткілікті).
Кептірілген ДНҚ-ны дистилденген суда ерітіп немесе ДНҚ-ны ұзақ уақыт сақтау үшін ТЕ-буферде еріткен дұрыс.
Қорытынды
Нуклеин қышқылын өсімдіктерден бөліп алу оның өзіндік ерекше қиындықтарымен байланысты, оны жоғары сапалы НА алу үшін жеңу керек. Бірінші маңызды проблема - бұл жасуша қабырғасы. Нуклеин қышқылдарының ерітіндіге түсуін қамтамасыз ету үшін бұл қабырғаны бұзу қажет. Екінші маңызды мәселе - полифенол деп аталатын өсімдікке тән заттардың көп мөлшері (оларды таниндер деп те атайды). Полифенолдар - көптеген ферментативті реакциялардың күшті ингибиторлары. ПТР, кері транскрипция, рестрикция және басқа осыған ұқсас процедуралардың тиімділігі тіпті аз мөлшерде полифенолдар болған кезде төмендейді.
Пайдаланылған әдебиеттер тізімі:
Мақала «СТАВ-метод выделения ДНК из растений (Doyle and Doyle, 1987)»
Мақала «Метод выделения растительной ДНК и растении» 2010 Л. А. Остроумов, А.Ю. Просеков, А.Н. Архипов, О.В. Мудрикова
