Өсімдік қорғаудағы биотехнология
№ 9-10 зертханалық – тәжірибелік сабақ Тақырыбы: Каллус ҧлпасын пассаждау
жүктеу/скачать 1,75 Mb. Pdf көрінісі
|
өс қорғаудағы биотехнология
|
№ 9-10 зертханалық – тәжірибелік сабақ
табақшасындағы каллус, залалсыздандырылған қҧралдар (скальпель, пинцет), залалсыздандырылған қағаз, фольга, МС қоректік ортасы бар Петри табақшалары (3 дана), аналитикалық таразы, фарфорлы стаканда спирт, спирт шам, сіріңке. Тапсырма: Каллустың ӛсуін бақылау. Каллусты жаңа қоректік ортаға кӛшіру.
жаңа қоректік ортаға ауыстырылады.Каллусты жаңа қоректік ортаға кӛшіру 4-6 аптада жҥргізіледі. Осы 4 апта ішінде әр 7 кҥн сайын 4 рет ӛлшенеді де (тәжірибе 4 қайталамада жҥреді) каллустың ӛсу қисық сызығы жасалады. Барлығы 100 ӛлшем керек, 100-150мг-нан. Салмағымен қоса каллустың тҥсін, консистенциясын сипаттау қажет. Ҧлпа консистенциясына каллустың тығыздығы мен борпылдақтығы жатады. Каллус суспензиясын алу ҥшін борпылдақ каллус тиімді. Ал тығыз каллус морфогенез ҥшін пайдаланылады.
ашамыз. Каллус ҧлпасын қысқышпен алып петри табақшасына салып бірнеше бӛлікке бӛлеміз (бӛліктер шамамен 100-150 мг-нан болу керек) Аналитикалық таразыны спиртпен сҥртіп каллус бӛліктерін фольга қағазға салып ӛлшейміз, кейін жаңа қоректік ортаға орналастырамыз. Табақшаны парафилммен орап жарық бӛлмеге орналастырады. 4 аптадан кейін залалсыз жағдайда ӛлшейді. Каллустың ӛсу жылдамдығын (интенсивтілігін) келесі формулаға (1) салып есептейді. 55
Шикі масса 2 – шикі масса 1 ӚЖ = -------------------------------------------- * 100 (1) шикі масса 1
шикі масса 1– пассажға дейінгі каллустың салмағы; шикі масса 2 – пассаждан кейінгі каллустың салмағы.
№ 11-12 зертханалық – тәжірибелік сабақ
құрал-жабдықтар:ӛсімдік жадығаты,буферленген физиологиялық ертінді, хлороформ, тӛменжылдамдықтағы және жоғарғы жылдамдықтағы центрифуга, полиэтиленгликоль 4000, тоңазытқыш.
және тазалау болашақта негізгі вирусқа спецификалы антидене шығаруға мҥмкіндік болып табылады.
инокуляциялағаннан кейін 20-25 тәулік ӛткеннен кейін 2 г жапырақ таңдап алады оны тоңазытқышта ҧстап (-70 0 С, 30 мин) 2 мл 0,5 М ЗФР- да, 1% меркаптоэтанолда және ЭДТА гомогендейді. 2 мл хлороформ қосады және 10 минут бӛлме температурасына қояды. 15 минут 5 000 жылд/мин центрифугалайды. Бӛлінген сӛлін алып тең мӛлшерде 4% полиэтиленгликоль қосып тоңазытқышқа 2 сағат
қояды. Центрифугалау12000 жылд/мин ӛтеді.
|