Программа по дисциплине; Приложение №1 к рабочей программе «Тематический план лекций»



бет8/20
Дата26.06.2018
өлшемі5,04 Mb.
түріПрограмма
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   20

Вопросы для самоконтроля


  1. Механизм реакций агглютинации.

  2. Виды реакций агглютинации

3. Использование реакций агглютинации

Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакция преципитации.

Цель: Разобрать механизм реакций преципитации и освоить методики постановки реакций кольцепреципитации и осадочной реакции преципитации.

Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций преципитации необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: преципитины; преципитиногены; реакции преципитации; токсины; антитоксины; реакции флокуляции

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

  1. Свойства преципитинов и преципитиногенов.

  2. Механизм реакции преципитации.

  3. Виды реакций преципитации (кольцепреципитация, осадочные, преципитации в агаре). Практическое использование реакций преципитации.

  4. Свойства токсинов и антитоксинов.

  5. Механизм реакции нейтрализации токсинов антитоксинами.

  6. Реакция флокуляции. Практическое использование реакций нейтрализации токсина антитоксином.


ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
Реакция кольцепреципитации

Оснащение:

Набор микропробирок, физраствор, преципитирующая сыворотка, преципитиноген в разведении 1/1000, пипетки



Схема постановки реакции

Разведение


антигена

1/1000

1/2000

1/3000

1/4000

1/5000

Физ.раствор

-

0,2

0,4

0,6

0,8

Преципитиноген

0,2

0,2

0,2

0,2

0,2

Преципитирующая сыворотка

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

Наслоить каждое разведение преципитиногена на преципитирующую сыворотку в объеме 0,2 мл.

Учет реакции производится в течение 10 минут после наслаивания антигена по образованию мутного кольца преципитата.



Разведения антигена

1/1000

1/2000

1/3000

1/4000

1/5000

Время появления кольца в минутах
















Вывод: При постановке реакции кольцепреципитации с___________________________

антигеном титр преципитиногена составил__________________.


Осадочная реакция Кана.

Оснащение:

Пробирки, пипетки, физраствор, антиген Кана, исследуемая сыворотка.



Схема постановки реакции

В чистую сухую пробирку наливают I мл антигена, в другую -I мл физ.раствора, который затем вливают в антиген ( I пробирка ) и, не дожидаясь отекания последних капель, быстро переливают смесь из одной пробирки в другую 6-7 раз, приготовленный антиген оставля­ют при комнатной температуре на 5-10 минут.

В чистую пробирку микропипеткой наливают 0,025 мл готового антигена, добавляют в него 0,15 мл испытуемой сыворотки. В конт­рольной пробирке к 0,025 мл антигена вместо сыворотки добавляют 0,15 мл физ.р-ра. Смеси в пробирках встряхивают в течение 3 мин., после чего каждую пробирку наливают по 0,5 мл физ.р-ра и произво­дят учет результатов. Для этого пробирки слегка наклоняют и в тонком слое жидкости рассматривают появление хлопьев преципитата.

Учет результатов:

++++ жидкость прозрачная, четко выраженный хлопьевидный осадок

+++ жидкость слегка опалеецирует, четко выраженный хлопьевидный осадок

++ жидкость опалеецирует, видимый хлопьевидный осадок

- при отрицательном результате жидкость в пробирке остается прозрачной или слегка опалесцирует.

Результат: ________________________________________________________________ .


Вывод: При постановке осадочной реакции с антигеном___________________________

реакция_____________________________________________________________________,

что свидетельствует о_________________________________________________________.

Вопросы для самоконтроля


  1. Механизм реакций преципитации.

  2. Виды реакций преципитации

  3. Использование реакций преципитации


Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Реакции лизиса и фагоцитоза.

Цель: Разобрать механизм реакций лизиса и фагоцитоза и освоить методику постановки реакции связывания комплемента.

Мотивация: Знание механизмов и методик постановки реакций лизиса и фагоцитоза необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: лизис; комплемент; фагоцитоз;

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

  1. Реакции лизиса. Виды. Механизм.

  2. Характеристика комплемента. Значение реакции лизиса в иммунитете и патологии.

  3. Реакция связывания комплемента. Механизм. Практическое использование.

  4. Фагоцитоз. Виды (завершенный, незавершенный, внешний). Практическое значение.


Реакция связывания комплемента (РСК)

Принцип метода:

Специфический комплекс АГ + АТ всегда адсорбирует на себе комплемент.



Инградиенты:

В РСК участвуют две системы:

1. Основная. Состоит из АГ и AT (один компонент известен, другой - нет). Если АГ соответствует AT, то образуется комплекс, который свяжет комплемент. Этот комплекс не виден. Об образовании его узнают при помощи 2й системы.

2. Индикаторная (гемолитическая) система. Состоит из эритроцитов барана (АГ) и соответствующей им гемолитической сыворотки (AT), т.е. это готовый иммунный комплекс

"+" феномен РСК - отсутствие гемолиза (содержимое лунки

мутное или на ее дне осадок эритроцитов

"—" феномен РСК - гемолиз ("лаковая кровь", жидкость прозрачна)

Определение фагоцитарного показателя

Для постановки опыта к 0,2 мл цитратной крови добавляют 0,1мл 2 млрд. взвеси бактерий. После инкубации в термостате при 37°С в течение 30 минут взвесь встряхивают, готовят мазки крови и окра­шивают по методу Романовского - Гимзе или метиленовой синью.

При микроскопии материала в разных полях зрения подсчитывают не менее 50 лейкоцитов и общее количество микробов в них. Фагоцитарный показатель получается при делении общего количества микробов, поглощенных фагоцитами, на количество фагоцитирующих клеток.

ПРИМЕР: в 50 лейкоцитах содержатся 184 бактерии

фагоцитарный показатель = 184 /50 = 3,68
Методика постановки опсоно-фагоцитщой реакции. Определение опсонического индекса.

Для определения опсонического индекса необходимо:

1- лейкоциты здорового человека или экспериментального животного

2 - взвесь бактерий, концентрацией 7-8 млрд. в I мл.

3 - исследуемая сыворотка, содержащая антитела к данному микробу.

4 - сыворотка здорового человека.

Готовят две взвеси:

I. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл иммунной сыворотки.

2. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл сыво­ротки здорового человека (контроль).

Смеси инкубируют в течение 10 минут при 3'7°С, после чего готовят мазки, окрашивают по Романовского-Гимза или метиленовой синью. Подсчитывают фагоцитарный показатель в отношении опыта и контроля. Отношение фагоцитарного показателя в присутствии иммун­ной сыворотки к фагоцитарному показателю в присутствии нормальной сыворотки составляет опсонический индекс.

ПРИМЕР: Фагоцитарный показатель иммунной сыворотки равен 40,

нормальный - 10, опсонический индекс равен 40/10 = 4.



ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ
Реакция связывания комплимента

Оснащение:

Пробирки, пипетки, физраствор, исследуемая сыворотка, антиген, гемолитическая сыворотка, комплимент, эритроциты барана.


Схема постановки РСК с одним антигеном

№ пробирки

1

2 (КАТ)

3(КАГ)

4

Физ.р-р

-

0,5

0,5

-

Сыворотка больного (антитела)

0,5

0,5

-

-

Антиген

0,5

-

0,5

-

Комплимент

0,5

0,5

0,5

-

Гемолитическая сыворотка

-

-

-

1,5

Эритроциты барана

-

-

-

1,5

Инкубация в термостате в течение 1 часа.

Гемолитическая система

1,0

1,0

1,0

-

Учет результата:
++++ полная задержка гемолиза (жидкость бесцветная, значительный осадок склеившихся эритроцитов).

+++ ясная задержка гемолиза (жидкость слабо розового цвета, значительный осадок эритроцитов).

++ частичная задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, компактный осадок эритроцитов).

+ слабая задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, незначительный осадок). - полный гемолиз (" лаковая кровь", отсутствие осадка).


Результат: 2 пробирка контроль антитела – _______________________________________

3 пробирка контроль антигена - _________________________________________________

1пробирка опытная - ___________________________________________________________

Вывод: При постановке реакции связывания комплемента с__________________________

антигеном ___________________________________________________________________.



I. до начала работы
Механизм противовирусного иммунитета
Общие принципы лабораторной диагностики
Протокол лабораторной работы
Тема: роль микроорганизмов в развитии кариеса
Общая и частная вирусология
Частная бактериология



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   20


©engime.org 2017
әкімшілігінің қараңыз

енгізу | тіркеу
    Басты бет


материалдарды жүктеу