Программа по дисциплине; Приложение №1 к рабочей программе «Тематический план лекций»



бет9/20
Дата26.06.2018
өлшемі5,04 Mb.
түріПрограмма
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   20

Вопросы для самоконтроля


  1. Механизм реакций лизиса

  2. Виды реакций лизиса

  3. Использование реакции связывания комплемента



Тема: Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций. Современные методы иммунодиагностики.

Цель: Ознакомиться с современными методами иммунодиагностики и освоить технику постановки иммуноферментного анализа. Закрепить знания по теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций».

Мотивация: Знание механизма и методики постановки реакции иммуноферментного анализа необходимо для серологической диагностики бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: радиоиммунный анализ; иммуноферментный анализ

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

  1. Радиоиммунный метод. Техника постановки. Практическое использование.

  2. Иммуноферментный анализ. Техника постановки. Практическое использование.


Иммуно-ферментный анализ (ИФА)
Принцип метода:

Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела, меченые ферментом и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок.

При соответствии АГ и AT жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорциональна количеству искомого ком­понента.

"+" феномен ИФА - появление окрашивания

"—" феномен ИФА - отсутствие окрашивания

ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ

Оснащение:

набор для постановки ИФА, исследуемая сыворотка.



Схема постановки реакции

1 фаза постановки ИФА.

Промывка пластины с антигеном фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл (4 капли) в каждую лунку (0,1 – 2 капли).




1

2

3

4

5

6

Исследуемая сыворотка 1/100

-

0,1

0,1

0,1

-

-

Контрольная сыворотка №1

-

-

-

-

0,1

-

Контрольная сыворотка №2

-

-

-

-

-

0,1

Контроль конъюгата

0,1

-

-

-

-

-

Инкубация пластины в термостате при 370С в течение 30 минут.
2 фаза постановки ИФA.

Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл в каждую лунку.






1

2

3

4

5

6

Перексидазный конъюгат

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

Инкубация пластин в термостате при 37°С в течение 30 минут.
3 фаза постановки ИФА.

Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2мл в каждую лунку.






1

2

3

4

5

6

Хромоген

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

Инкубация пластин в термостате при 370С в течение 10 минут.Во все лунки добавить по I капле серной кислоты (Н2 SO4).

Учет результатов:

Результат ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность при длине волны 492нм.

ИФА положителен, если показатель оптического поглощения иссле­дуемой сыворотки превышает оптическую плотность критического.

Оптическая плотность критического = 0,1 + оптическая плотность контрольного конъюгата.

При визуальной регистрации реакции считают положительными, если имеются отчетливые различия в интенсивности окраски при реакции исследуемой сыворотки по сравнению с отрицательной контрольной сывороткой (появление интенсивно желтого окрашивания).

Результат: 5-я лунка (контроль сыворотки отрицательный) - .

6-я лунка (контроль сыворотки положительный) - .

1-я лунка (контроль коньюгата) - .

2,3,4 лунки (опытные) - .

Вывод: При постановке реакции ИФА с антигеном _________________________________

реакция_________________________,что свидетельствует о __________________________

Вопросы для самоконтроля


  1. Механизм радиоиммунного анализа

  2. Механизм иммуно-ферментного анализа

  3. Использование реакций


Основная литература

1.Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиологиялогия: учеб. пособиен для студентов мед вузов/. А.А.Воробьев и др. – 4-е изд., стер.- М.:Академия, 2010.-461 с: ил.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб. для мед. вузов / А.И.Коротяев и др.- 4-е изд., испр. И доп..- СПб.: СпецЛит, 2008. – 767 с.

3. Медицинская микробиология/ под ред. Поздеева O.K. - М.:ГЭОТАР Медиа, 2006. – 765 с.
Дополнительная литература

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии : учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.С.Быкова, А.А. Воробьева, В.В.Зверева - 2-е изд.- М. : «Миа», 2008. - 272 с.

2. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарная микробиология: учебное пособие для студентов высших медицинских учебных заведении / А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков – 2-е изд., М.: Академия, 2006.

3. Емцев В.Т., Мишустин Е.Н. Микробиология: учебник для вузов -5-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2005.- 442с.

4.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Зверева В.В., Бойченко М.Н. Учебник в 2-х томах, М.: ГЭОТАР- Медиа, 2010.

5.«Определитель бактерий Берджи». Под ред. Хоулта Дж., Крича Н., Смита П. И др. В двух томах. М.: «Медицина», 1982.



6. «Внутрибольничные инфекции». Под редакцией Венцела Р.П. М.: «Медицина»,1990.

7. Кузнецов Е.А. с соавт. Микробная флора полости рта и ее роль в

развитии патологических процессов. – М: «Медицина» -1996 г.

8. Боровский Е.В., Леонтьев В.К. Биология полости рта. – М: «Медицина». - 1991 г.



Перечень вопросов и заданий для самостоятельной работы

1. По теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций заполнить в рабочей тетради разделы для самостоятельной работы: основные свойства антигенов; антигенная структура бактериальной клетки; антигенная структура вирусов; строение иммуноглобулинов; применение антигенов и антител (биопрепараты); реакция агглютинации; реакция пассивной гемагглютинации; реакция связывания комплемента; иммуно-ферментный анализ



РАЗДЕЛ 1. Общая вирусология.

Вирусологический метод лабораторной диагностики
Тема: ОБЩАЯ ВИРУСОЛОГИЯ. ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Цель: Освоить методику приготовления первично-трипсинизированной культуры клеток.

Овладеть техникой заражения культур клеток. Сформировать знания и освоить методику индикации и идентификации вирусов на культурах клеток. Узнать основные методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.



Мотивация. Знание материала по данной теме является базовой основой для изучения частной вирусологии. Освоение студентами основных методов лабораторной диагностики вирусных заболеваний необходимо для правильной интерпретации полученных результатов исследования.

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы: типы культур клеток; культивирование вирусов; индикация вирусов; идентификация вирусов; вирусологический метод диагностики.

Вопросы к занятию:

1.Химический состав, ультраструктура, морфология вирусов.

2.Принципы классификации.

3.Характеристика вирусного генома.

4.Взаимодействие вируса и клетки.

5.Методика получения тканевых культур: типы культур клеток

6.Вирусологический метод лабораторной диагностики. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах и экспериментальных животных. Методы индикации. Методы идентификации.

7.Экспресс-диагностика вирусных инфекций (реакции иммуно-флюоресценции, преципитации в капилляре, ПЦР).

8.Серологический метод диагностики вирусных инфекций (РТГА, РН, РСК, ИФА).
Строение вирусов:

Вирусы мельчайшие внеклеточные микроорганизмы, способны размножаться только в живой клетке, абсолютные паразиты. Все вирусы существуют в двух формах: внеклеточной (вирион) и внутриклеточной (вирус). Любая вирусная частица содержит:


Рисунок

Название

Функция




  1. Нуклеиновая кислота




  1. Капсид




  1. суперкапсид (пеплас)




  1. нуклеокапсид




  1. экзоферменты




  1. углеводистые рецепторы




  1. липиды




  1. гемагглютинин




Химический состав вирусов:
Нуклеиновая кислота 2-50%

Белки 10-70%

Жиры 0-24%

углеводы 1-2%



Минеральные соли 1%

Воды вирусы не содержат ни свободной, ни связанной.
Антигенная структура вирусной частицы:

  • S – антигены нуклеокапсида;







  • экзоферменты (чаще белкового происхождения, разрушающие клеточную стенку).



Форма вирусов:


Форма

Примеры



























Размеры вирусов: Вирусы увидеть невозможно в световом микроскопе, кроме вируса натуральной оспы, самый крупный вирус 500нм или 500мкм. Большинство вирусов от 8 нм до 500 нм.
Тип симметрии - .
Тропизм - .

ПРИНЦИПЫ КЛАССИФИКАЦИИ ВИРУСОВ:


принцип

группы

примеры


1. по форме:

1.




2.




3.




4.




2. типу симметрии

1.




2.




3. чувствительности

к эфиру

1.




2.




4. типу нуклеиновой кислоты:

1.




2.





5. тропизму:

1.




2.




3.




4.




6. наличию гемагглютинина

1.




2.






взаимодействие вируса и клетки.
Различают 3 вида взаимодействия вируса и клетки:


Название

Сущность

  1. Вирулентная вирусная инфекция.




  1. Персистирующая вирусная инфекция.




3. Опухолевая трансформация.





Этапы взаимодействия вируса и клетки





Этапы взаимодействия

Механизм

  1. Адсорбция




  1. Проникновение




  1. Синтез вирусных компонентов




  1. Выход вируса из клетки






I. до начала работы
Механизм противовирусного иммунитета
Общие принципы лабораторной диагностики
Протокол лабораторной работы
Тема: роль микроорганизмов в развитии кариеса
Общая и частная вирусология
Частная бактериология



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   20


©engime.org 2017
әкімшілігінің қараңыз

енгізу | тіркеу
    Басты бет


материалдарды жүктеу