2 3 -Т а р а у . И м м у н д ы қ д и а г н о с т и к а п р и н ц и п т е р і м е н ә д іс т е р і
521
тылған кой антиденелерінің 50 мкл Ғ(аЬ)2-фрагментін косады.
Еріту үшін құрамы 0,5% желатиннен және 0,1% натрий азидінен
тұратын, фосфатпен буферленген (РВ5) (РВ8 Хенкс ерітіндісін
колдануға болады) физ. ерітіндіні колданады. Жасушаларды
суспензиялайды және +4 °С 30 мин инкубациялайды.
6. 3 -4 тармакта көрсетілгендей жасушаларды 2 рет жуады.
7. Жасушалар иммунды флюоресценциямен карауға дайын, бірак
сынаманың нәтижесін бірнеше сағаттан сон алатын болсак, онда
жасушаларды бекітеді. Ол үшін сонғы рет айналдырған және
супернатаны алып тастағаннан кейін жасушалар тұнбасына РВ8-
ке (РВ5-ке 1:40 сұйьштылған формалин ерітіндісін колдануға
болады) 50 мкл 1% параформальдегидті косады. Жасушаларды
суспензиялайды.
Бекітілген
жасушалар
флуоресценциясын
бірнеше апта бойы сактайды.
Боялған жасушаларды ағымды цитофлуориметрде талдайды не-
месе флуоресценттік микроскоп аркылы карайды. Соңғы жағдайда
жасушаларды суспензиялайды, суспензияны заттык әйнекке ауысты-
рады, жабынды әйнекпен жабады және препаратты флуоресценттік
микроскоппен (*90 объектив) иммерсия астында карастырады.
Суреттін сапасын жоғарылату үшін окулярдың аздаған үлкейткіштігін
(хЗ немесе х 1,7) қолданады. Флуоресценттік емес иммерсиялык
майды колданған жөн. Бақылауды караңғы бөлмеде жүргізген дұрыс.
Теріс бакылау препаратында бакыланатын антиген-позитивтік
жасушалардың санын, 200 лимфоциттерді карағанда флуоресцентті
жасушалардың %-ын алып тастағанда, флуоресценттік жасушалардын
%-дык ретін аныктайды. Теріс бакылау ретінде, сол бойынша ұксас
дайындалған, бірак моноклонды антиденелердін орнына жасушалар-
ды Хенкс ерітіндісімен немесе калыпты тышкан 1§-мен өңделген пре-
параттарын колданады.
ИММУНДЫҚ ТАЛДАУ ӘДІСТЕРІ
Казіргі кезде антигендік касиеті бар және зерттелу материалын-
да өте аз концентрациялы болатын әр түрлі молекулаларды сандык
түрінде иммундык талдау әдістерімен — радиоиммунды талдау
(РИТ) және иммундыферментті талдаумен (ИФТ) аныктауға болады.
Достарыңызбен бөлісу: