Выделение геномной ДНК из листьев древесных растений
Электрофорез ДНК в агарозном геле
жүктеу/скачать 54,5 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Фотографирование и анализ спектров ДНК
| Электрофорез ДНК в агарозном геле
1. Взвесить необходимое количество агарозы. Количество агарозы рассчитывается по формуле: m = V*C/100%, где m – масса агарозы в граммах, V – объем геля в мл, С – концентрация агарозы в процентах. 2. Перенести агарозу в термостойкую стеклянную посуду на 250 мл и залить нужным количеством буфера 1х TBE (или 1х STBE). 3. Добавить нужный объем бромистого этидия (объем бромистого этидия, вносимого в гель, равен (в мкл) 1/10 объема геля (в мл)). Работу с бромистым этидием вести в перчатках, перед открыванием пробирки аккуратно стряхнуть ее содержимое на дно центрифугированием в течение 3 сек. при 2400 об/мин. 4. Подготовить форму для геля и установить подготовленную форму горизонтально на стол. 5. Вставить в прорези формы гребенки так, чтобы расстояние от дна формы до зубцов гребенки составляло 2 – 3 мм, крайние зубцы не должны касаться боковых стенок формы. Гребенка должна быть параллельна торцам формы. 6. Нагревать агарозу в микроволновой печи до полного растворения при регулярном помешивании. После закипания (дождаться появления крупных пузырей) достать колбу и остудить до температуры 55°– 60°С. Добавить в смесь бромистый этидий, хорошо перемешать и залить его в форму для геля. Проверить положение гребенок и оставить гель для застывания на 20–30 мин. 7. В пробирки с амплификационной смесью добавить по 1 капле глицерина, тщательно перемешать смесь на вортексе и центрифугировать пробирки 5 сек. при 2400 об/мин. Расставить пробирки в соответствии с порядком нанесения проб. После полного застывания геля залить его буфером 1x TBE и аккуратно вытащить гребенки. Слить буфер и нанести на гель отдельной микропипеткой пробы (по 10 мкл) и маркер молекулярного веса (6 мкл). 8. Аккуратно поместить гель в камеру для электрофореза, закрыть крышку камеры, включить источник тока и провести электрофорез в режиме 5 В/см. 9. Электрофорез проводить в течение 2 ч. Убедиться, что полосы четко видны, выключить ток, снять крышку камеры и достать гель из формы (работать в перчатках). Фотографирование и анализ спектров ДНК 1. Поместить гель на рабочее стекло системы гель-документации Gel Doc XR , опустить защитное стекло и включить систему гель-документации. 2. Сфотографировать полученные спектры ДНК (рис.2) с помощью системы гель-документации в коротковолновом УФ-свете и сохранить результаты в памяти компьютера. 3. Провести обработку спектров ДНК с помощью программ «Adobe Photoshop» или «Quantity One». жүктеу/скачать 54,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|