Фолий қышқылының құрамын анықтау
жүктеу/скачать 260,41 Kb.
|
Фолий қышқылының құрамын анықтау
- Бұл бет үшін навигация:
- Жабдықтар мен реактивтер.
- Талдау барысы
|
Фолий қышқылының құрамын анықтау фолий қышқылын сандық анықтау үшін оны белсендірілген көмірмен адсорбциялайтын сүтті қолданады. Содан кейін оны калий перманганатымен тотықтырады, нәтижесінде фо-ли қышқылынан парааминобензой қышқылы, глут-мин қышқылы және птеридин-6-карбон қышқылы (немесе альдегид) ыдырайды, ол 470 нм кезінде ең жоғары шаммен қарқынды-көк флюоресценция береді. Таралуы. Фолаттар табиғатта кең таралған. Көптеген микроорганизмдер, сондай-ақ төмен және жоғары өсімдіктер фолаттарды синтездеуге қабілетті. Сүтқоректілер мен құстардың тіндерінде фолаттар түзілмейді. Өсімдік және жануарлар тіндерінде птероилмоноглютамин ки-слоттары аз мөлшерде құнарландырылған. Бұл витаминнің адам тамақтануындағы негізгі көздері жаңа піскен көкөністер мен көк (мкг%): салат, шпинат – 48 – 115, қырыққабат – 15 – 30, сәбіз – 7 – 15, қызанақ - 3-15, пияз. Жануар тектес өнімдерден ең бай фолаттар (220-294 мкг%) және бүйрек, жұмыртқа сарысы (3 – 8 мкг%), ірімшік (8 – 19 мкг%). Жабдықтар мен реактивтер. Флюорометр. Термостат 40 °С.Су моншасы. Дөңгелек колба (Вюрца). 25 мл-ге өлшегіш колба; № 2 Сүзгіш воронка; 100 мл-ге өлшегіш колбалар (2 дана); 1 мл-ге бір белгісі бар тамшуырлар (2 дана). 25 және 100 мл тұмсығы бар өлшеу цилиндрлері (4 дана). Жаңа сүт. Толуол. Белсендірілген көмір. Пенициллин пленкасы – протеолитикалық ферменттердің көзі (penicillum тереңдік мицелийі ацетонмен кептіріледі және тығыны бар сауытта сақталады). Күкірт қышқылы (2 % - дық және 15 %-дық). Натрий гидроксиді (15 %-дық). Этил спиртінде Аммиак (3 %-дық) (70 %-дық). Калий перманганаты (4 %-дық). Сутегі пероксиді (3 %-дық). Фолий қышқылының бастапқы стандартты ерітіндісі (20 мг перкристаллизацияланған фолий қышқылының 10%-дық натрий гидроксидінің үш ка-плямен қорғалған 100 мл суға ерітеді. Ерітіндіні хо-лодильникте, толуол астында қараңғы сауытта сақтайды. Талдау алдында фолий қышқылының стандартты жұмыс ерітіндісін 100 есе еріте отырып, дайын жұмыс ерітіндісі (жұмыс стандартты ерітіндісінің 1 мл-де 2 мкг фолий қышқылы бар). Талдау барысы. Колбаға 35 мл сүт, 45 мл су құйылады және рН = 3,5-4,0 дейін күкірт қышқылының 15% ерітіндісінің бірнеше тамшысын жеткізеді. Одан кейін колбадағы сұйықтықты 32 °С – қа дейін салқындатады және оның рН-ын натрий гидроксидінің 4,5-5,0 15% ерітіндісіне дейін жеткізеді. Бұдан әрі колбаға 10 мл суға бөлінген 200 мг пенициллин пленкасын, 3 толуол тамшысын енгізеді, ішіндегіні жақсылап араластырады және 38-40 °С кезінде 16-18 сағат ферменттейді. сүзгіштегі тұнбаны екі рет шағын су үлестерімен жуады. Коникалық колбаға 50 мл сүзгі енгізеді, оны 15% күкірт қышқылының ерітіндісімен рН = 3 дейін қышқылдайды және 100 мг белсендірілген көмір себеді. Қоспаны араластырған кезде тартқыштың астында 5 мин қайнатады,содан кейін вакууммен кеуекті шыны сүзгі арқылы сүзеді. Бунзен колбасын ауыстырады және сол сүзгі арқылы 5 рет қайнағанға дейін қыздырылған аммиак ерітіндісін көмірден фолий қышқылын алу үшін 70% спиртте өткізеді (барлығы элюция үшін 70 мл сұйықтықты алады: бірінші рет-20 мл, екінші және үшінші рет-15 мл; төртінші және бесінші рет – 10 мл). Қалдықты өлшеу колбасына 25 мл-ге ауыстырады және күкірт қышқылының 2%- дық ерітіндісімен рН = 3-ке дейін қышқылдайды, одан кейін 10 мин ішінде жойылмайтын қызғылт бояу пайда болғанға дейін калий перманганатының 4%- дық ерітіндісін тамшылар арқылы қосады.натрий гидроксидінің ерітіндісімен. Жалпы көлемі 25 мл-ге дейін сумен жеткізіледі. Сұйықтықты сүзеді және флюорометрде 470 нм болғанда флюоресценцияның қарқындылығын өлшейді. Сонымен қатар фолий қышқылының стандартты ерітіндісінің флюоресценциясының қарқындылығын өлшейді,ол сыналатын ерітінді (бақылау тәжірибесі) және өңделмеген стан-дартты ерітінді сияқты тәсілмен өңделеді. Фолий қышқылының құрамы мынадай формула бойынша есептеледі: с – фолий қышқылының құрамы (мкг/мл); а – сыналатын ерітіндіге арналған флюорометр көрсеткіші; А1 – бақылау ерітіндісіне арналған флюорометр көрсеткіші; А2 – фолий қышқылының стандартты ерітіндісіне арналған флюорометр көрсеткіші; b – стандартты ерітіндіге 1 мл – дегі фолий қышқылының мөлшері; а – сүттің салмағы (г); V – адсорбция үшін алынған фильтраттың мөлшері (мл); V1 – анықтау үшін алынған ерітіндінің соңғы көлемі (мл); Vo-сумен сұйылудан кейінгі гидролизат көлемі (мл);) [1]. жүктеу/скачать 260,41 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|