Микробиологиялыќ зертхана
Ультракүлгін сәуле әсерімен жүретін мутациялардың
жүктеу/скачать 6,39 Mb. Pdf көрінісі
|
сабақ түсіндірген бойынша
| Ультракүлгін сәуле әсерімен жүретін мутациялардың
индукциясы. Ультра күлгін сәулесінің әсері бактерияларды, соның ішінде Escherichia coli- дің мутация алдындағы зақымдалуларын және олардың мутацияға ұшырауы мен бөлінуін ынталандырады. 50 Ультракүлгін сәулесінің көзі ретінде ВУФ-15 бактероцидтік шамы қолданылады. Қондырғы сәулеленетін нысанның ортасынан 60 см қашықтықта орналастырылады. Ультракүлгін сәулесі Escherichia coli -дің ДНҚ-ын зақымдай . Мұндай сәулелендіруді қызыл немесе қараңғыда жерде өткізген дұрыс. Алдын ала ультракүлгін сәулесінің бактероцидтік дозасы анықталынады. Бактероцидтік дозаның оңтайлы мөлшерін тірі қалған бактериялардың санына (0,1-1%-ға тең) сәйкес есептеп шығарады. Escherichia coli -дің lac -мутанттарын бөліп алу үшін зерттелетін өсіндіні алдын ала 14-18 сағат бойы сұйық қоректік ортада өсіреді. 1 мл сұйық қоректік ортадағы бактерия жасушаларының мөлшері шамамен 2∙10 8 болуы керек. Пайда болған бактерия жасушаларын центрифугалау арқылы тұндырып, 40 мл 0,1М MgSO 4 ерітіндісінде қайта араластырады да, жасушалардың бөлінуі тоқтағанша мұзда салқындатады. 50 мл көлемдегі сузпензияны стерильді Петри шынысына құйып, 15-150 секунд бойы сәулелендіреді. Сәулелендірілген бактерия жасушаларын центрифугағаннан кейін пайда болған тұнбаны бастапқы мөлшердегі сұйық қоректік ортамен қайта араластырып, шыны түтікке құяды. Шыны түтіктегі өсіндіні 37ºС температураға реттелген термостатта 14- 18 сағат инкубациялайды. Сонан соң 10 -2 -10 -5 дайындалған сұйылтымдарының 0,1 мл-інен Петри шыныларындағы тығыз селективті қоректік ортаға (Эндо қоректік ортасы) себінді жасалады. Антибиотиктерге төзімді мутанттарды бөліп алу жұмыстарында Escherichia coli -дің В және К штамдары қолданылады. Оларды сәулелендіргеннен кейін белгілі бір концентрациядағы антибиотик (ампициллин - 0,01 мг/мл, левомицетин - 0,005 мг/мл, пенициллин - 0,1 мг/мл) қосылған агарға себінді жасалады. Эндо қоректік ортасында Escherichia coli -дің lac -мутанттары түссіз колонияларды түзеді. Аталмыш концентрациядағы антибиотиктер қосылған қоректік ортада Escherichia coli жасушалары өсетін болса, онда ол антибиотиктерге резистентті болып табылады (нәтижесі бақылаудағы өсінділермен салыстырылу арқылы бағаланады). жүктеу/скачать 6,39 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|