Монография под редакцией А. Л. Хохлова, Н. В. Пятигорской Отделение медицинских наук ббк 2. П86

аналита с помощью жидкостно-жидкостной или твёрдофазной экстракции 
[210, 211, 370, 371]. Так, при разработке ВЭЖХ-МС/МС-методики опреде-
ления микофеноловой кислоты (МФК) в плазме обратную конверсию её фе-
нольного глюкуронида (ФГМФК) удалось нивелировать путём изменения 
условий изократического элюирования на градиентное (табл. 15) [208, 369]. 
В случае применения метода ГХ-МС для измерения концентрации МФК в 
плазме её основной метаболит удалось изолировать путём селективной экс-
тракции метиленхлоридом при коррекции до величины рН 2,0: ФГМФК при 
данных условиях не экстрагируется (рис. 27) [211, 371]. Уменьшение темпе-
ратуры в источнике ионов для устранения фрагментации возможно, напри-
мер, при совместном определении ацетилсалициловой и салициловой кис-
лоты [212, 213]. При этом необходимо учесть, что смягчение оптимальных 
условий хромато-масс-спектрометрического определения, в большинстве 
случаев, приводит к снижению чувствительности. 
Рис. 27.
Примеры хроматограмм образца плазмы, содержащего ФГМФК в концентрации
100 мкг/мл (А) и МФК в концентрации 0,05 мкг/мл, после дериватизации экстракта при ис-
пользовании ГХ-МС-метода
Глава 3. Фармацевтическая разработка лекарственных препаратов
203

Эффект матрицы – это подавление или усиление аналитического сигнала 
под влиянием компонентов биологической матрицы, приводящее к сниже-
нию прецизионности результатов. При использовании для количественного 
определения метода хромато-масс-спектрометрии данное явление происхо-
дит из-за коэлюирования эндогенных веществ, главным образом, фосфоли-
пидов, вместе с молекулами аналита. Известны следующие способы устра-
нения матричных эффектов [212, 213]:
1. Изменение условий подготовки проб для селективной экстракции ана-
лита: замена осадителя при использовании депротеинизации; замена экс-
трагента при жидкостно-жидкостной экстракции, замена вида сорбента при 
твёрдофазной экстракции; замена способа подготовки проб. 
2. Изменение параметров хроматографического разделения: замена вида 
сорбента хроматографической колонки (C18-, C8-, фенилгексилсиликагели 
и. т.д.), применение двумерной хроматографии, изменение параметров элю-
ирования, состава подвижной фазы [209, 375]. 
3. Изменение условий масс-спектрометрического детектирования: сме-
на полярности, изменение способа ионизации с электрораспылительной на 
химическую ионизацию при атмосферном давлении, при которой эффект 
матрицы отсутствует. 
4. Применение изотопно-меченных внутренних стандартов (молекул 
анализируемых веществ, в которых несколько атомов заменены на стабиль-
ные изотопы дейтерия, углерода (
13
С), азота (
15
N) или кислорода (
18
О)) для 
расчёта концентраций. Данные молекулы элюируются вместе с аналитом, 
поэтому компоненты биологической пробы не влияют на относительную 
эффективность ионизации, и соотношение откликов аналит/внутренний 
стандарт остаётся постоянным. 
Таким образом, использование вышеперечисленных мер, а также пра-
вильное изучение эффекта матрицы в рамках валидации методики позволит 
избежать получения ложных результатов. 
Нестабильность лекарственных веществ и их метаболитов в биологиче-
ских жидкостях после отбора у добровольцев является фактором риска, ко-
торый может привести к получению ошибочных результатов. Для снижения 
данного риска перед проведением клинической части необходимо предпри-
нять меры для предотвращения разложения лекарственных веществ и их 
метаболитов, содержащих потенциально нестабильные функциональные 
группы, в биологических пробах. Примерами легкоразлагающихся соеди-
нений являются фенолы, тиолы, подверженные процессам окисления, и 
сложные эфиры, лактоны, коньюгаты лекарственных веществ (глюкурони-
ды, сульфаты и т.д.), подверженные процессам гидролиза. Известны случаи 
деградации лекарственных препаратов под действием ультрафиолетового 
излучения. Замедлить разложение изучаемых соединений в биологических 
объектах можно путём подбора антикоагулянта (в т. ч. ингибиторов фермен-
тов), комбинации антикоагулянта и раствора стабилизатора (антиоксидан-
тов, буферных растворов, растворов кислот и оснований для коррекции рН). 
204

жүктеу/скачать 3,82 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: