При изучении дисциплин «Химия и микробиология воды», «Основы биотехнологиче- ских процессов обработки воды» и «Методологические основы исследования в биотехноло- гии» студенты факультета водохозяйственного строительства выполняют санитарно- микробиологические исследования природной и водопроводной (питьевой) воды. При вы- полнении санитарно-бактериологического анализа водопроводной воды студенты проводят проверку соответствия ее качества нормативным требованиям СанПиН 2.1.4.1074–01 [1].
При исследовании хозяйственно-бытовых сточных вод членами студенческих бригад на основе смывов с рук моделируются хозяйственно-бытовые стоки. Из «смоделированных» образцов хозяйственно-бытовых сточных вод готовятся десятичные разведения воды в 10, 100, 1000, 10000 раз (1-е, 2-е, 3-е и 4-е разведения). Для этого используется стерильная вода: 4 пробирки (9 см3). Для приготовления 1-го разведения 1 см3 анализируемой воды стериль- ным шприцом вносится в одну из пробирок со стерильной водой. Каждое последующее раз- ведение готовится новым стерильным шприцем, путем внесения 1 см3 предыдущего разведе- ния в стерильную воду. Работа выполняется в области пламени спиртовки с соблюдением мер предосторожности против внесения посторонней микрофлоры.
Для определения числа сапрофитных бактерий в 1 см3 воды (общее количество бакте- рий) в три подготовленные стерильные чашки Петри с указанием номеров бригад и разведе- ний воды (1-е, 2-е, 3-е) стерильным шприцем вносится по 1 см3 соответствующего разведе- ния. В чашки заливается расплавленный и охлажденный до 45–50ºС мясопептонный агар (МПА). До застывания среды чашки Петри остаются на столе. Для выращивания чашки ста- вят в термостат при 37ºС.
Обнаруженные в воде бактерий группы кишечных палочек (БГКП) – показатель фе- кального загрязнения воды, а их количество позволяет судить о степени загрязнения. Для определения числа лактозоположительных кишечных палочек бродильным методом в 4 бродильные пробирки с глюкозопептонной средой вносятся стерильным шприцем по 1 см3 каждого из разведений анализируемой воды. Посевы инкубируются в термостате при 37ºС.
Из поставленных в термостат чашек Петри каждая бригада отбирает чашки с числом колоний от 30 до 300. В каждой чашке с помощью прибора для счета микробных колоний подсчитываются все колонии (поверхностные и глубинные) (рис. 2, б).
а б
Рис. 2. Образцы с чашкой Петри: а – тест на определение присутствия общих колиформных бактерий в исследуемых пробах воды на агаре Эндо; б – посевы для определения общего микробного числа
по десятичным разведениям исследуемой воды
Установленное в каждой чашке количество выросших колоний пересчитывается с уче- том соответствующего разведения анализируемой воды. Содержание сапрофитных бактерий (общее микробное число) соответствует среднему арифметическому результатов определе- ния соответствующих разведений. По содержанию сапрофитных бактерий вода относится к определенный категории степени загрязнения по ОМЧ. Членами бригад просматриваются пробирки с посевами разведений воды в глюкозопептонную среду. Для дальнейшего иссле- дования отбирают пробирки с выявленными изменениями среды – помутнение, покраснение (кислота), газообразование (из поплавков-газовок вытеснена жидкость). Отсутствие пере- численных признаков позволяет дать отрицательный ответ о наличии бактерий группы ки- шечных палочек в засеянном объеме воды.
Из пробирок, где отмечено помутнение, кислота и газ, а также помутнение и кислота, проводится высев жидкости стерильной петлей на агар Эндо по секторам, соответствующим разведению. При посеве соблюдаются правила стерильности. Чашки крышками вниз ставят в термостат на 16–18 ч при 37ºС.
Бактерии группы кишечной палочки на агаре Эндо растут в виде темно-красных с ме- таллическим блеском и без него колоний (лактозоположительные) (рис. 2, а). Для оконча-
тельного решения о принадлежности темно-красных колоний к общим колиформным бакте- риям выполняется окрашивание микроскопических препаратов из лактозоположительных колоний классическим методом Грама. Наличие в окрашенных мазках палочковидных кле- ток розового цвета (грамотрицательных) подтверждает присутствие в анализируемом объе- ме БГКП.
По результатам определения в каждой пробе воды устанавливают наименьший объем воды, содержащий БГКП (коли-титр), см3, и число лактозоположительных кишечных пало- чек в 1 дм3 воды (коли-индекс).
Установлена степень загрязнения каждой из «смоделированных» проб воды по ОМЧ и БГКП. В исследованных пробах сточной воды ОМЧ изменялось от 11500 до 72000 клеток в 1 см3, что соответствует степени загрязнения по ОМЧ – грязные. Степень загрязнения по БГКП – умеренно загрязненная, загрязненная и очень грязная. Коли-титр изменялся от 0,1 до 0,001 см3, а коли-индекс – от 104 до 106.
Планируется проведение исследований по оценке эффективности ультрафиолетового облучения на степень обеззараживания воды.
Список литературы
Федеральный закон – Технический регламент «О безопасности питьевой воды». Проект // Питьевая вода. – 2010. – № 1.
СанПиН 2.1.4.1074–01. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству централизованных сис- тем питьевого водоснабжения. Контроль качества. – М. : Роспотребнадзор, 2006.
Зуев Е.Т. Питьевая и минеральная вода. Требования мировых и европейских стандартов к качеству и безопасности / Е.Т. Зуев, Г.С. Фомин. – М. : Протектор, 2003.
МУ 2.1.4.1184–03. Методические указания по внедрению и применению санитарно-эпидемиологи- ческих правил и нормативов СанПиН 2.1.4.1116–02. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества. – М. : Минздрав России, 2003.
МР 24 ФЦ/513. Определение колиформных бактерий и E. Coli с использованием хромогенных и флюорогенных индикаторных сред производства компании «Merck» (Германия). – М. : Минздрав России, 2003.
МУК 4.2.1018–01. Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды. – М. : Минздрав России,
2001.
Методические рекомендации № 24 ФЦ/6289. Методы определения колиформных бактерий, бактерий
вида E. Coli с применением пластин «Petrifilm» производства компании 3М (США). – М. : Минздрав РФ, 2006.
SUMMARY
I.G. Ushakova, A.M. Geselko, O.V. Shirochenko, S.A. Anisimova
The results of investigation of sanitary-bacteriological indicators based on ʻʻsimulatedʼʼ samples of domestic wastewater.
Keywords: drinking water, sanitary requirements, total bacterial count, coliform bacteria, fermentation method, household wastewater, pollution degree.
Достарыңызбен бөлісу: |