Омарова аккенже бердихановна
СТ НАО 990240005606-001-2019
жүктеу/скачать 8,57 Mb. Pdf көрінісі
|
Диссертация
| СТ НАО 990240005606-001-2019
воды и вносят 1 мл твина-80. Тщательно перемешивают. Раствор пептона с твин-80 добавляют к вышеуказанной смеси. Доводят объем жидкости дистиллированной водой до 500 мл, затем гидролизованным молоком Богданова до 1000 мл; рН среды 6,2-6,6. Среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют в течение 20 мин при 0,05 МПА (режим № 2). 6.4.2.2 МРС-4 плотная питательная среда. Применяется для определения количества живых микробных клеток лактококков. В отличие от среды МРС-1 содержит 2,5% агар- агара, рН среды 6,2-6,6. Стерилизуют по режиму № 2. 6.4.2.3 МРС - плотная питательная среда для определения антагонистической активности производственных штаммов и препарата. 6.4.2.4 Натуральное обезжиренное молоко доводят до кипения или до температуры (90±2) о С на 15 минут, затем охлаждают до 48-50 єС заполнением рубашки реактора холодной водой. Подщелачивают (20±2)% раствором едкого натрия до рН 8,0±0,2. рН определяют потенциометрически (ЛПУ-1 или рН-340). После установки рН к 1 л молока добавляют 1 г сухого порошка панкреатина с ферментативной активностью 45 Е.Д. Порошок лучше предварительно развести в небольшом количестве теплого молока. Через 10 мин добавляют 1% хлороформа или толуола. Реактор выдерживают при температуре. 45-46єС в течение 72 часов (3 суток). В течение первых часов следует несколько раз перемешать обезжиренное молоко, открывая при этом воздушный фильтр (для удаления паров). Через 72 часа гидролизат декантируют в бутыли и хранят в холодной камере. Обычно рН среды не требует корректирования и равен 3,4-6,6. Готовый гидролизат желтоватого цвета, прозрачный или слегка опалесцирущий. Биохимические показатели гидролизата: аминный азот (0,17±0,02)% пептон (16±0,2)% триптофан (0,04±0,002)% 6.4.2.5 Сухой препарат содержит культуральную бимассу и обезжиренное молоко в качестве защитной среды 6.4.3 Проведение испытаний Навеску препарата по 1 г из 3 вскрытых упаковок (всего 3г) суспендируют в 300 смі стерильного 0,9%-ного раствора натрия хлорида, в результате чего в 1 см і суспензии содержание сухого препарата равно 0,01 г. Оставляют на 4 ч при комнатной температуре, встряхивая через 20-30 мин. Затем содержимое колбы тщательно перемешивают вручную в течение 10 минут и приготавливают ряд последовательных 10-кратных разведений. Для этого 1 смі приготовленной суспензии стерильной пипеткой переносят в пробирку с 9 смі стерильного раствора натрия хлорида, получая разведение 10 -1 , затем из разведения 10 -1 и переносят 1 смі взвеси во вторую пробирку, получая разведение 10 -2 . Операцию повторяют до разведения 10 -7 . Для получения каждого последующего разведения используют отдельную стерильную пипетку. Сухой препарат заливают 0,85% раствором натрия хлорида. С учетом массы порошка доводят объем растворителя до 10 мл (например, порошок массой 0,5 г - в 9,5 мл и т.д.). Это первое разведение (10 -1 ). Оставляют на 4 ч при комнатной температуре, встряхивая через 20- 30 мин. Затем содержимое колбы тщательно перемешивают вручную в течение 10 минут и приготавливают ряд последовательных 10-кратных разведений. Из полученной взвеси в пробирках готовят последовательные, десятикратные разведения до 10 -7 или до 10 -8 в 0,85% растворе натрия хлорида, используя для каждого разведения отдельную пипетку вместимость I мл. Из полученных разведений 10 -6 ; 10 -7 ; или 10 -7 и 10 -8 высевают 0,1 мл микробной суспензии (пипеткой вместимостью I мл) на две чашки Петри со средой МРС-4. Из двух |