Микробиологиялыќ зертхана
Полимеразалық тізбекті реакцияны (ПТР)
жүктеу/скачать 6,39 Mb. Pdf көрінісі
|
сабақ түсіндірген бойынша
|
Полимеразалық тізбекті реакцияны (ПТР) 1983 жылы Кэри Мюллис ашқан. ПТР кейінгі кезде инфекциялық аурулардың балауда қолданылатын нақты және сезімтал әдістердің бірі болып саналуда. ПТР бактерия немесе вирустардың генін in vitro жағдайында термостабильді ДНҚ-полимераза ферментінің көмегімен бірнеше миллион есе көбейтіп алып (амплификация), электрофорезбен анықтауға бағытталған. Бұл реакция ДНҚ репликациясы деп те аталады. Табиғи жағдайда ДНҚ репликациясы бірнеше сатыдан тұрады: 1) ДНҚ денатурациясы (ДНҚ қос жіпшесінің тарқатылып, ажырауы); 2) ДНҚ-ның синтезделуіне қажетті қысқа екі тізбекті ДНҚ учаскесінің қалыптасуы; 3) ДНҚ-ның жаңа тізбегінің синтезделуі (қос жіпшенің комплементарлы құрастырылуы). Бұл реакцияда микроорганизмдер генінің учаскесінің құрылымын қайталауға қатынасатын, жасанды жолмен синтезделген олигонуклеотид пен Tag- полимераза ферменті қолданылады. Tag- полимераза ферментінің көмегімен ДНҚ-ның телімді фрагменті қалыптасады. Жаңадан қалыптасқан ДНҚ фрагменттері нуклеин қышқылдарының 52 жаңа тізбектерін синтездеуге арналған матрица ретінде амплификацияның келесі циклдерінде пайдаланылады. Полимеразалық тізбекті реакцияның қойылым жолы үш кезеңнен тұрады (21-сурет): биологиялық материалдардан ДНҚ бөліп алу; полимеразалық тізбекті реакцияны қою; электрофорез немесе гибридизациялы-ферменттік детекция (амплификация өнімдерінің детекциясы). жүктеу/скачать 6,39 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|