Омарова аккенже бердихановна



Pdf көрінісі
бет54/96
Дата06.02.2022
өлшемі8,57 Mb.
#79166
түріДиссертация
1   ...   50   51   52   53   54   55   56   57   ...   96
Байланысты:
Диссертация

3.4Сүтқышқылды 
өнімдерден 
бөлініп 
алынған 
өсінділерді 
идентификациялау нәтижелері 
Сүт қышқылды бактерияларды заманауи молекулярлық әдістермен 
идентификациялау аталмыш ғылыми жұмыстың негізгі жаңалығын 
сипаттайтын басты концепциялардың бірі. Себебі өндірісте қолданылатын 
өсінділерді түрге дейін ажырату мкиробиологиядағы классикалық әдістердің 
орнын басқаны белгілі. Идентификациялау әдістерінің тиімділігі өсінділерді 
өндірісте қолдану мақсатында ұсынылатын медицина және ветеринария үшін 
де маңызы зор. Себебі, тек заманауи молекулярлық әдістермен ғана 100 пайыз 
нақты нәтижеге қол жеткізуге болады. Бұл тарауда Чехия мемлекеті, Прага 
қаласындағы «Жаратылыстану ғылымдары университеті», «Микробиология, 
тағамдану және диетология» кафедрасының зертханасында түйе сүті, қымыз, 
шұбат және құрт тәрізді сүт қышқылды өнімдерден бөлініп алынған 14 
өсіндінің зерттеу нәтижелері 14 кестеде келтірілген [106]. 


Кесте 14 – Өсінділерді заманауи молекулярлық әдіспен идентификациялау 
нәтижелері 
 
Өсінділер 
Ұсынылған түрдің сәйкестігі 
API 50 CHL 
MALDI- TOF 
16s rRNA 
5-2M 
Lactobacillus 
helveticus 
Lactobacillus 
ultunensis 
Lactobacillus 
helveticus
5-5M 
Lactobacillus brevis
сенімсіз 
идентификация
 
Lb. pontis 
6-2M 
Lactobacillus 
acidophilus 
Lactobacillus 
kefiranofaciens 
Lb kefiranofaciens 
6-12M 
Lb. pontis 
сенімсіз 
идентификация 
Lb. pontis 
7-1M 
Lact.lactis 
subsp.
 
lactis
Lactococcus lactis 
Lactococcus 
lactis 
subsp.
 lactis 
7-4M 
Lact.lactis 
subsp.
 
lactis
Lactococcus lactis 
Lact.lactis 
subsp.
 
hordiane 
7-8M 
Lact.lactis 
subsp.
 
lactis
Lactococcus lactis 
Lact.lactis 
subsp.
 
lactis 
7-1C 
Lactobacillus brevis 
сенімсіз 
идентификация 
Bifidobacterium 
crudilactis
*

7-2C 
Lactobacillus brevis
сенімсіз 
идентификация 
Bif.crudilactis
*

7-5C 
Lactobacillus brevis
сенімсіз 
идентификация 
Bif.crudilactis
*

7-6C 
Lactobacillus brevis
сенімсіз 
идентификация 
Bif.crudilactis*
8-2M 
Lactobacillus 
paracasei 
Lactobacillus 
paracasei 
Lb. paracasei 
8-6M 
Lactobacillus brevis 
Lactobacillus brevis 
Lb. brevis 
8-9M 
Lactobacillus brevis 
Lactobacillus 
paralimentarius 
Lb. crustorum 


90 
 
 
Сурет 2 - Өсінділерді заманауи молекулярлық әдіспен идентификациялау 
мақсатындағы дайындық кезеңдері 
Суретте иденфикациялау жұмыстарын жүргізуге сүт қышқылды 
өнімдерден бөлініп алынған өсінділерді дайындау үрдісінен көріністер 
көрсетілген. Бұл жұмыстың нақты нәтижесі өсінділердің тазалығына тікелей 
байланысты. Сондықтан ең алдымен өсінділердің тазалығы микроскоптау 
әдісімен зерттеліп, арнайы журналға тіркеліп отырды. 
 
3.4.1 Бифидобактерияларды анықтау үшін фосфокетолазаны талдау 
нәтижелері 
Бифидобактерияларды фосфокетолазды талдау бойынша анықтау 
жұмысының нәтижелері 
Bifidobacterium
түріне жататын өсінділерді 
сәйкестендіру мақсатында фосфокетолаза сынағында жасушаларды бұзу үшін 
CTAB ерітіндісін тиімді пайдалануға болатынын растайды. Бұл әдістің 
тиімділігі – морфологиялық сипаты бойынша бифидобактерияларға тән көрініс 
көрсеткен өсінділерді жылдам уақытта 
Bifidobacterium 
туысына жататындығы 
немесе бұл туыстыққа жатпайтындығын көрсетеді. 
 
Қызыл-күлгін түс ультрадыбыс немесе ЦТАБ-пен өңделу арқылы клетка 
жасушаларының бұзылу үрдісіне қарамастан лактобактериялар жасушаларына 
тән емес, фидобактериялар жасушаларының бұзылуы арқылы пайда болады.
Фосфокетолаза 
фруктозо-6-фосфатының 
белсенділігі 
тек 
қана 
Bifidobacteriaceae
тұқымдастығының мүшелеріне ғана тән. Сол себепті Orban 
мен Patterson сипаттаған (2000) әдіс бойынша штамдардың F6PPK
белсенділігін анықтау нәтижесі барлық бифидобактериялар деп болжамданған 
7-1С, 7-2С, 7-5С, 7-6С өсінділері оң нәтиже көрсетті. Бұл өсінділердің 
Bifidobacteriaceae
туыстығына жататындығын тез арада дәлелдеуге мүмкіндік 
берді [107]. 
Bifidobacterium
туысына жататын өсінділерді сәйкестендіру 
мақсатында фосфокетолазды талдаудағы жасушаларды бұзу үшін цетримоний 
бромиді (ЦТАБ) немесе соникациялық салыстыру әдісінің нәтижесі 15 кестеде 
келтірілді.
 


91 
Кесте 15 -
Bifidobacterium
туысына жататын өсінділерді сәйкестендіру 
мақсатында фосфокетолазды талдаудағы жасушаларды бұзу үшін цетримоний 
бромиді (ЦТАБ) немесе соникациялық салыстыру әдісінің нәтижесі
 
 
Бактерия өсінділері 
Жасушаларды бұзу әдісі немесе түстің 
өзгеруі 
ЦТАБ (4 ml) 
Түстің өзгеруі (6 min) 
Lactobacillus helveticus 5-2 M 


Lactobacillus pontis 5-5 M 


Lactobacillus kefiranofaciens 6-2M 


Lactobacillus pontis 6-12 M 


7-1М Lact.lactis subsp lactis 


7-4М Lact.lactis subsp hordiane 


7-8М Lact.lactis subsp lactis 


Bif.crudilactis 7-1C 
++ 
+++ 
Bif.crudilactis 7-2C 
+++ 
+++ 
Bif.crudilactis 7-5C 
+++ 
+++ 
Bif.crudilactis 7-6C 
+++ 
+++ 
Lactobacillus paracasei 8-2M 


Lactobacillus brevis 8-6 M 


Lactobacillus crustorum 8-9M 


Түс қарқындылығы- = жоқ, + = жарық, ++ = қара, + + + =өте қара. 
 
3.4.2 Api TEST әдісін бактерияларды идентификациялау үшін қолданудың 
тиімділігі 
Api TEST әдісін бактерияларды идентификациялау үшін қолданудың 
тиімділігін 
ұғыну 
үшін 
физиологиялық-биохимиялық 
қасиеттері, 
фосфокетолазаны талдау нәтижелері бойынша бифидобактериялар болу 
мүмкіндігін көрсеткен 4 өсіндінің көмірсуларды ыдырату қабілеттері 
анықталған болатын. Зерттеу нәтижелері аталмыш 4 өсіндінің де 
Lactobacillus 
brevis
тобына жататындығын көрсетті.
 
Алайда 
Bifidobacterium 
өкілдерінің 
көмірсуларды ыдырату қабілеті бойынша Чехия мемлекеті, Прага қаласындағы 
«Жаратылыстану ғылымдары университеті», «Микробиология, тағамдану және 
диетология» кафедрасының зертханасында италяндық сырдан бөлініп алынған 
типтік штаммдармен салыстыра отырып зерттелді. Зерттеу нәтижелері 16
кестеде көрсетілген.
Кесте 16 -
Bifidobacterium 
штаммдарының салыстырмалы түрде көмірсуларды 
ыдырату қабілеті бойынша нәтижелері
Ферменттер 
Test 
LMG 
23609 
S13 S17 
7-1C 7-2C 7-5C 7-6C 
Целлобиоза 
CEL 







Рибоза 
RIB 









92 
16 кестенің жалғасы 
Ксилоза 
DXYL 







Галактоза 
GAL 







Глюкоза 
GLU 







Фруктоза 
FRU 







Метил-D-
Маннопиранозид 
MDM 







Раффиноза 
RAF 







Манноза 
MNE 







Эскулин 
ESC 







Мелезитоза 
MLZ 







Тураноза 
TUR 







Мальтоза 
MAL 







Лактоза 
LAC 







Мелибиоза 
MEL 







Сахароза 
SAC 







Метил-D-
глюкопиранозида 
MDG 







Гентибиоз 
GEN 







Биохимиялық тест бойынша типтік 
B.crudilactis

B.crudilactis S13
,
 
B.crudilactis S17
штаммдары, түйе сүтінен бөлініп алынған 4 өсіндінің де 
көмірсулар метаболизмі барлығы үшін де бірдей болып шықты. Барлық 
штаммдар рибозаны, галактозаны, глюкозаны, фруктозаны, раффинозаны, 
туранозаны, мальтозаны, лактозаны, мелибиозаны және сахарозаны 
утилизациялайды. Барлық 7-2C, 7-5C, 7-6C өсінділері көмірсуларды 
ферментациялау бойынша 
B. crudilactis 
типтік штаммына ұқсас профиль 
көрсетті. Тек метил-D-маннопиранозид, ксилоза, манноза ферменттері бойынша 
өсінділер арасында айырмашылықтар орын алды.
Сонымен қатар түйе сүтінен бөлініп алынған барлық жаңа өсінділер 
эскулин ферментін ыдыратпады. Алайда гентибиоз ферментін тек 7-1C, 7-2C 
және 7-5C өсінділері ыдыратты. 
B.crudilactis S13, B.crudilactis S17
штаммдарымен және басқа да жаңа өсінділермен салыстырғанда зерттелініп 
жатырған 7-1С өсіндісі ксилоза мен маннозаны ферменттеді. Бұл өсінді 
сонымен бірге, целлобиозаны, рибозаны, галактозаны, глюкозаны, фруктозаны, 
раффинозаны, мелезитозаны, туранозаны, мальтозаны, лактозаны, мелибиозды, 
сахарозаны, метил-D-глюкопиранозиданы типтік штамм тәрізді ферменттеді.
Италяндық сырдан бөлініп алынған 
Bifidobacterium
өкілдері мен түйе 
сүтінен бөлініп алынған өсінділер арасындағы айырмашылықтар 16 кестеде 
келтірілген.
Метил-D-глюкопиранозида ферменті тек типтік штаммен және
B. 
crudilactis S17
штаммымен ғана ферменттелді. 
B. crudilactis 
S13 және 
B. 
crudilactis S17 
штаммдары целлибиозаға, ксилоза, манноза, гентибиозаға теріс 
әсер көрсетті. 7-1С өсіндісі типтік штамм тәрізді целлобиозаны ферменттеген 
болатын.


93 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   50   51   52   53   54   55   56   57   ...   96




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет