Программа по дисциплине; Приложение №1 к рабочей программе «Тематический план лекций»

Вопросы для самоконтроля

1. 
   Механизм реакций агглютинации.
   
2. 
   Виды реакций агглютинации
   

Мотивация:

1. 
   Свойства преципитинов и преципитиногенов.
   
2. 
   Механизм реакции преципитации.
   
3. 
   Виды реакций преципитации (кольцепреципитация, осадочные, преципитации в агаре). Практическое использование реакций преципитации.
   
4. 
   Свойства токсинов и антитоксинов.
   
5. 
   Механизм реакции нейтрализации токсинов антитоксинами.
   
6. 
   Реакция флокуляции. Практическое использование реакций нейтрализации токсина антитоксином.
   

Набор микропробирок, физраствор, преципитирующая сыворотка, преципитиноген в разведении 1/1000, пипетки

Учет реакции производится в течение 10 минут после наслаивания антигена по образованию мутного кольца преципитата.

антигеном титр преципитиногена составил__________________.

Пробирки, пипетки, физраствор, антиген Кана, исследуемая сыворотка.

В чистую сухую пробирку наливают I мл антигена, в другую -I мл физ.раствора, который затем вливают в антиген ( I пробирка ) и, не дожидаясь отекания последних капель, быстро переливают смесь из одной пробирки в другую 6-7 раз, приготовленный антиген оставля­ют при комнатной температуре на 5-10 минут.

В чистую пробирку микропипеткой наливают 0,025 мл готового антигена, добавляют в него 0,15 мл испытуемой сыворотки. В конт­рольной пробирке к 0,025 мл антигена вместо сыворотки добавляют 0,15 мл физ.р-ра. Смеси в пробирках встряхивают в течение 3 мин., после чего каждую пробирку наливают по 0,5 мл физ.р-ра и произво­дят учет результатов. Для этого пробирки слегка наклоняют и в тонком слое жидкости рассматривают появление хлопьев преципитата.

Учет результатов:

++++ жидкость прозрачная, четко выраженный хлопьевидный осадок

+++ жидкость слегка опалеецирует, четко выраженный хлопьевидный осадок

++ жидкость опалеецирует, видимый хлопьевидный осадок

- при отрицательном результате жидкость в пробирке остается прозрачной или слегка опалесцирует.

Результат: ________________________________________________________________ .

реакция_____________________________________________________________________,

что свидетельствует о_________________________________________________________.

Вопросы для самоконтроля

1. 
   Механизм реакций преципитации.
   
2. 
   Виды реакций преципитации
   
3. 
   Использование реакций преципитации
   

1. 
   Реакции лизиса. Виды. Механизм.
   
2. 
   Характеристика комплемента. Значение реакции лизиса в иммунитете и патологии.
   
3. 
   Реакция связывания комплемента. Механизм. Практическое использование.
   
4. 
   Фагоцитоз. Виды (завершенный, незавершенный, внешний). Практическое значение.
   

Специфический комплекс АГ + АТ всегда адсорбирует на себе комплемент.

В РСК участвуют две системы:

1. Основная. Состоит из АГ и AT (один компонент известен, другой - нет). Если АГ соответствует AT, то образуется комплекс, который свяжет комплемент. Этот комплекс не виден. Об образовании его узнают при помощи 2^й системы.

2. Индикаторная (гемолитическая) система. Состоит из эритроцитов барана (АГ) и соответствующей им гемолитической сыворотки (AT), т.е. это готовый иммунный комплекс

"+" феномен РСК - отсутствие гемолиза (содержимое лунки

мутное или на ее дне осадок эритроцитов

"—" феномен РСК - гемолиз ("лаковая кровь", жидкость прозрачна)

Определение фагоцитарного показателя

Для постановки опыта к 0,2 мл цитратной крови добавляют 0,1мл 2 млрд. взвеси бактерий. После инкубации в термостате при 37°С в течение 30 минут взвесь встряхивают, готовят мазки крови и окра­шивают по методу Романовского - Гимзе или метиленовой синью.

При микроскопии материала в разных полях зрения подсчитывают не менее 50 лейкоцитов и общее количество микробов в них. Фагоцитарный показатель получается при делении общего количества микробов, поглощенных фагоцитами, на количество фагоцитирующих клеток.

ПРИМЕР: в 50 лейкоцитах содержатся 184 бактерии

фагоцитарный показатель = 184 /50 = 3,68
Методика постановки опсоно-фагоцитщой реакции. Определение опсонического индекса.

Для определения опсонического индекса необходимо:

1- лейкоциты здорового человека или экспериментального животного

2 - взвесь бактерий, концентрацией 7-8 млрд. в I мл.

3 - исследуемая сыворотка, содержащая антитела к данному микробу.

4 - сыворотка здорового человека.

Готовят две взвеси:

I. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл иммунной сыворотки.

2. 0,1 мл взвеси лейкоцитов + 0,1 мл взвеси бактерий + 0,2 мл сыво­ротки здорового человека (контроль).

Смеси инкубируют в течение 10 минут при 3'7°С, после чего готовят мазки, окрашивают по Романовского-Гимза или метиленовой синью. Подсчитывают фагоцитарный показатель в отношении опыта и контроля. Отношение фагоцитарного показателя в присутствии иммун­ной сыворотки к фагоцитарному показателю в присутствии нормальной сыворотки составляет опсонический индекс.

ПРИМЕР: Фагоцитарный показатель иммунной сыворотки равен 40,

нормальный - 10, опсонический индекс равен 40/10 = 4.

Пробирки, пипетки, физраствор, исследуемая сыворотка, антиген, гемолитическая сыворотка, комплимент, эритроциты барана.

+++ ясная задержка гемолиза (жидкость слабо розового цвета, значительный осадок эритроцитов).

++ частичная задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, компактный осадок эритроцитов).

+ слабая задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена, незначительный осадок). - полный гемолиз (" лаковая кровь", отсутствие осадка).

3 пробирка контроль антигена - _________________________________________________

1пробирка опытная - ___________________________________________________________

Вывод: При постановке реакции связывания комплемента с__________________________

антигеном ___________________________________________________________________.