ПАМЯТКА
для студентов, работающих в бактериологической лаборатории
I. До начала работы проверить состояние рабочего места и микроскопа; сообщить о недостатках дежурному и устранить их.
II. Во время работы:
1) не разбрасывать по столу лабораторные принадлежности (пробирки, бактериологическая петля, краски, иммерсионное масло и т. д.);
2) экономно расходовать краски и спирт; по окончании работы сразу же гасить спиртовку;
3) во время посевов не разговаривать и не ходить по лаборатории;
4) на всех пробирках и чашках с посевами написать свой рабочий номер.
III. По окончании занятия:
1) сдать дежурным методическое пособие, план работы, посевы и полученный инструментарий;
2) произвести тщательную уборку микроскопа и поставить егo на стол для микроскопов;
3) привести в порядок рабочее место; вытереть стол тряпкой, смоченной дезинфицирующим раствором; выключить свет;
4) подписать у преподавателя протокол работы;
5) перед уходом из лаборатории вымыть руки; при необходимости, обработать дезинфицирующим раствором, включить бактерицидную лампу.
В бактериологической лаборатории ВОСПРЕЩАЕТСЯ:
1) находиться без халата и маски;
2) принимать пищу и курить;
3) класть на столы портфели и сумки;
ОБЯЗАННОСТИ ДЕЖУРНЫХ
I. До начала занятия:
1) проверить состояние лаборатории; о замеченных недостатках сообщить преподавателю;
2) раздать методические пособия;
3) принести из термостата посевы, сделанные на предыдущем занятии, и раздать их студентам.
II. Во время занятия:
1) по указанию преподавателя раздать студентам чашки, пробирки и другие принадлежности, необходимые для работы.
III. По окончании работы:
1) собрать все материалы на поднос в определенном порядке и сдать его вместе с методическими пособиями в лаборантскую;
2) собрать в ящик чашки и пробирки с посевами, проверить надписи, вложить в ящик № группы и отнести его в термостат;
3) собрать отработанные пробирки и чашки на стол для грязной посуды.
4) Проверить состояние рабочих мест и устранить дефекты уборки.
5) Выключить свет и воду.
ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ТЕХНИКИ.
В микробиологической лаборатории производятся следующие виды исследований:
Бактериоскопическое – изучение микроорганизмов под микроскопом.
Бактериологическое – изучение микроорганизмов методом культивирования (выращивания) на искусственных питательных средах.
Биологическое (экспериментальное) – определение микроорганизмов или их токсинов методом заражение лабораторных животных.
Серологическое – метод определения титра антител в сыворотке больного.
Микроскоп (от греческого слова micros – малый и scopeo – смотрю) служит для изучения малых объектов, невидимых простым глазом.
Рис. 1. Микроскоп МБИ-1:
1 — окуляр;
2 — тубус наклонный;
3 — тубусодержатель;
4 — объектив;
5 — предметный столик;
6 — конденсор;
7 — зеркала;
8 — револьвер на салазках;
9 — ножка-башмак
В микроскопе различают механическую и оптическую часть (рис. 1)
Механическая часть -
Штатив, в котором различают нижнюю часть, или ножку (9), и верхнюю часть, или тубусодержатель (3).
Предметный столик (5), на котором помещается исследуемый объект.
Тубус (2) – подвижная трубка, к которой прикрепляются линзы, служащие для увеличения исследуемого объекта.
Макрометрический винт – служит для первоначальной грубой наводки.
Микрометрический винт – служит для более точной установки, один поворот которого передвигает тубус на 0,1 мм.
Револьвер (8) – позволяет установить необходимый объектив.
Оптическая часть –
Окуляр (1) – служит для увеличения не исследуемого предмета, а только его изображения, имеет 2 линзы: верхняя – глазная, нижняя – собирательная. На окулярах имеются цифры, обозначающие даваемое увеличение (7, 8, 10,15)
Объективы (4) – представляют собой систему двояковыпуклых линз, заключенных в металлическую оправу. На оправе объективов указывается даваемое ими увеличение (8,10, 20,40, 60, 90). Различают два типа объективов: сухие и иммерсионные (погружные). При исследовании микроорганизмов применяется исключительно иммерсионная система.
Зеркало (7) – служит для отражения световых лучей по направлению к объективу и через него внутрь микроскопа. Одна сторона зеркала плоская – пользуются при дневном рассеянном свете, другая вогнутая – при искусственном освещении.
Конденсор (6) – представляет собой двояковыпуклую линзу, конденсирующую пучки световых лучей для наибольшего освещения исследуемого предмета.
Общее увеличение микроскопа равняется произведению из увеличения объектива на увеличение окуляра. Так, например, комбинация иммерсионного объектива х90 с окуляром х10 дает увеличение объекта в 900 раз.
ВИДЫ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Иммерсионная микроскопия наиболее часто применяется для изучения морфологии микроорганизмов с использованием иммерсионного масла.
Исследование в тёмном поле применяют для микроорганизмов, которые плохо воспринимают окраску или не красятся совсем (лептоспироа, вибрионы, спирохеты). Тёмное поле создаётся при помощи щелевого ультрамикроскопа, зетемнением в объективе или затемнением в конденсоре.
В основе фазово-контрастной микроскопии лежит явление изменения фаз световой волны, благодаря чему усиливается контрастность изображения объекта. Прозрачные и малоконтрастные биологичвские объекты выглядят при том черно-серыми на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на тёмном фоне (негативный контраст) иногда применяется для наблюдения за живыми объектами в раздавленной, висячей капле или специальных микроскопах (размножение, фагоцитоз, движение, иммобилизация, взаимодействие бактерий и бактериофагов, влияние различных веществ).
Люминесценция - свечение, сопровождающееся выделением тепла или возникающее под влиянием источника энергии (световые, рентгеновские лучи, электрический разряд). Способность объектов светиться самостоятельно называется фотолюминесценцией. Вторичная или непрямая люминесценция возникает после окраски объектов флюорохромами. В качестве флюорохрома часто используют акридин жёлтый, акридин оранжевый, аурамин. Люминесцирующий микроскоп - это обычный биологический микроскоп, оснащённый источником интенсивного ультрафиолетового света и светофильтрами. Люминесцентная микроскопия используется для идентификации возбудителей, В -, Т - лимфоцитов и их субпопуляций, для обнаружения иммунных комплексов в случаях аутоиммунных заболеваний.
Электронный микроскоп даёт возможность рассматривать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности оптического микроскопа (0,2 мкм). Используется для визуального изучения вирусов и структур клетки. В качестве источника освещения используется поток электронов с длиной волны в I05-6 раз меньше длины волны спектра видимого света. Эти микроскопы дают увеличение более чем в 200 000 раз и разрежающую способность до А (ангстрем равен 108 см).
МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ.
Методом бактериоскопического исследования определяют морфологические и тинкториальные свойства (способность окрашиваться различными красителями) микроорганизмов.
ПРОТОКОЛЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название
______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название
_______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
|
|
|
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
Латинское название _______________
Материал________________________
Окраска_________________________
|
|
|
Тема: МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ.
ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ. ОКРАСКА ПО ГРАМУ. ИТЛГЛВОЕ ЗАНЯТИЕ
Цель: Научиться готовить и окрашивать фиксированные препараты по Граму с плотной и жидкой питательных сред и изучать морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов. Изучить строение бактериальной клетки, функции и методы выявления отдельных органоидов.
Мотивация: Определение микроорганизмов по морфологическим и тинкториальным свойствам необходимо при изучении всех разделов частной микробиологии.
Основные вопросы, разбираемые на занятии:
Основные морфологические группы бактерий. Отличия клеток прокариотов от эукариотов.
Особенности морфологии хламидий, микоплазм, риккетсий, бактерий, грибов, актиномицетов, спирохет и простейших.
Основные методы микроскопии. Методы изучения структуры бактериальных клеток и их практическое значение.
Приготовление препаратов для микроскопического исследования. Понятие о простых и сложных методах окраски.
Бактериоскопический метод диагностики, его достоинства и недостатки.
МОРФОЛОГИЯ основных групп МИКРООРГАНИЗМОВ.
Морфология бактерий - размер, форма и взаимное расположение бактериальных клеток.
Возбудителями инфекционных процессов у человека могут быть вирусы, хламидии, микоплазмы, рикетсии, бактерии, простейшие и грибы.
Вирусы - микроорганизмы, размером 1-800 нм в диаметре, не имеющие клеточного строения, содержащие один тип нуклеиновой кислоты, абсолютные паразиты (размножаются только внутриклеточно).
Хламидии - микроорганизмы размером 8 - 1000 нм в диаметре, не имеющие клеточного строения, содержащие оба типа нуклеиновой кислоты» абсолютные паразиты.
Микоплазмы г. полиморфные микроорганизмы, размером от I нм до 10мкм, имеют два типа нуклеиновой кислоты, размножаются делением» не имеют клеточной стенки»
Риккетсии - полиморфные микроорганизмы, клеточного строения, размером от 0,5 до 10 мкм, не имеют дифференцированного ядра (прокариоты), размножаются делением, абсолютные паразиты.
Бактерии - прокариоты, размером от 0,5 до 10 мкм, размножаются делением.
Актиномицеты – имеют клеточную стенку, цитоплазматическую мембрану, нуклеотид, рибосомы и внутриклеточные включения. Они представляют собой нитевидные, ветвистые клетки, занимающие промежуточное положение между бактериями и грибами.
Простейшие - одноклеточные микроорганизмы размером от 5 до 80 мкм, имеют дифференцированное ядро, размножаются делением.
Грибы - одноклеточные или многоклеточные микроорганизмы от 5 до 1000 мкм, имеют дифференцированное ядро, размножаются спорами.
Морфологию микроорганизмов (размер, форма и взаимное расположение бактериальных клеток) изучают в нативных препаратах типа раздавленной капли, в охраненных и фиксированных мазках, используя иммерсионную систему объектива микроскопа.
ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ГРУППЫ БАКТЕРИЙ
Достарыңызбен бөлісу: |