Программа по дисциплине; Приложение №1 к рабочей программе «Тематический план лекций»

Вопросы для самоконтроля

1. 
   Механизм реакций лизиса
   
2. 
   Виды реакций лизиса
   
3. 
   Использование реакции связывания комплемента
   

1. 
   Радиоиммунный метод. Техника постановки. Практическое использование.
   
2. 
   Иммуноферментный анализ. Техника постановки. Практическое использование.
   

Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела, меченые ферментом и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок.

При соответствии АГ и AT жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорциональна количеству искомого ком­понента.

"+" феномен ИФА - появление окрашивания

"—" феномен ИФА - отсутствие окрашивания

ПРОТОКОЛ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ

Оснащение:

набор для постановки ИФА, исследуемая сыворотка.

1 фаза постановки ИФА.

Промывка пластины с антигеном фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл (4 капли) в каждую лунку (0,1 – 2 капли).

	1	2	3	4	5	6
Исследуемая сыворотка 1/100	-	0,1	0,1	0,1	-	-
Контрольная сыворотка №1	-	-	-	-	0,1	-
Контрольная сыворотка №2	-	-	-	-	-	0,1
Контроль конъюгата	0,1	-	-	-	-	-

Инкубация пластины в термостате при 37⁰С в течение 30 минут.
2 фаза постановки ИФA.

Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2 мл в каждую лунку.

Промывка пластин троекратно фосфатно-солевым буфером по 0,2мл в каждую лунку.

Результат ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность при длине волны 492нм.

ИФА положителен, если показатель оптического поглощения иссле­дуемой сыворотки превышает оптическую плотность критического.

Оптическая плотность критического = 0,1 + оптическая плотность контрольного конъюгата.

При визуальной регистрации реакции считают положительными, если имеются отчетливые различия в интенсивности окраски при реакции исследуемой сыворотки по сравнению с отрицательной контрольной сывороткой (появление интенсивно желтого окрашивания).

Результат: 5-я лунка (контроль сыворотки отрицательный) - .

6-я лунка (контроль сыворотки положительный) - .

1-я лунка (контроль коньюгата) - .

2,3,4 лунки (опытные) - .

Вывод: При постановке реакции ИФА с антигеном _________________________________

реакция_________________________,что свидетельствует о __________________________

Вопросы для самоконтроля

1. 
   Механизм радиоиммунного анализа
   
2. 
   Механизм иммуно-ферментного анализа
   
3. 
   Использование реакций
   

1.Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиологиялогия: учеб. пособиен для студентов мед вузов/. А.А.Воробьев и др. – 4-е изд., стер.- М.:Академия, 2010.-461 с: ил.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб. для мед. вузов / А.И.Коротяев и др.- 4-е изд., испр. И доп..- СПб.: СпецЛит, 2008. – 767 с.

3. Медицинская микробиология/ под ред. Поздеева O.K. - М.:ГЭОТАР Медиа, 2006. – 765 с.
Дополнительная литература

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии : учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.С.Быкова, А.А. Воробьева, В.В.Зверева - 2-е изд.- М. : «Миа», 2008. - 272 с.

2. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарная микробиология: учебное пособие для студентов высших медицинских учебных заведении / А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков – 2-е изд., М.: Академия, 2006.

3. Емцев В.Т., Мишустин Е.Н. Микробиология: учебник для вузов -5-е изд., перераб. и доп. - М.: Дрофа, 2005.- 442с.

4.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Зверева В.В., Бойченко М.Н. Учебник в 2-х томах, М.: ГЭОТАР- Медиа, 2010.

5.«Определитель бактерий Берджи». Под ред. Хоулта Дж., Крича Н., Смита П. И др. В двух томах. М.: «Медицина», 1982.

7. Кузнецов Е.А. с соавт. Микробная флора полости рта и ее роль в

развитии патологических процессов. – М: «Медицина» -1996 г.

8. Боровский Е.В., Леонтьев В.К. Биология полости рта. – М: «Медицина». - 1991 г.

1. По теме «Серодиагностика бактериальных, вирусных, грибковых и протозойных инфекций заполнить в рабочей тетради разделы для самостоятельной работы: основные свойства антигенов; антигенная структура бактериальной клетки; антигенная структура вирусов; строение иммуноглобулинов; применение антигенов и антител (биопрепараты); реакция агглютинации; реакция пассивной гемагглютинации; реакция связывания комплемента; иммуно-ферментный анализ

Овладеть техникой заражения культур клеток. Сформировать знания и освоить методику индикации и идентификации вирусов на культурах клеток. Узнать основные методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

1.Химический состав, ультраструктура, морфология вирусов.

2.Принципы классификации.

3.Характеристика вирусного генома.

4.Взаимодействие вируса и клетки.

5.Методика получения тканевых культур: типы культур клеток

6.Вирусологический метод лабораторной диагностики. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах и экспериментальных животных. Методы индикации. Методы идентификации.

7.Экспресс-диагностика вирусных инфекций (реакции иммуно-флюоресценции, преципитации в капилляре, ПЦР).

8.Серологический метод диагностики вирусных инфекций (РТГА, РН, РСК, ИФА).
Строение вирусов:

Вирусы мельчайшие внеклеточные микроорганизмы, способны размножаться только в живой клетке, абсолютные паразиты. Все вирусы существуют в двух формах: внеклеточной (вирион) и внутриклеточной (вирус). Любая вирусная частица содержит:

Рисунок	Название	Функция
	Нуклеиновая кислота
	Капсид
	суперкапсид (пеплас)
	нуклеокапсид
	экзоферменты
	углеводистые рецепторы
	липиды
	гемагглютинин

Химический состав вирусов:
Нуклеиновая кислота 2-50%

Белки 10-70%

Жиры 0-24%

углеводы 1-2%

• 
  S – антигены нуклеокапсида;
  

• 
  поверхностные V - антигены (H - гемагглютинин и фермент N - нейроминидаза, способствующие развитию иммунных реакций);
  

• 
  экзоферменты (чаще белкового происхождения, разрушающие клеточную стенку).