Руководство Инфекционные болезни Главные редакторы акад. Ран н. Д. Ющук, акад. Раен ю. Я. Венгеров


IIIIIIIII Термическая денатурация ДНК (30-40 с при 93-95 °С)



Pdf көрінісі
бет62/664
Дата26.12.2023
өлшемі31,6 Mb.
#199567
түріРуководство
1   ...   58   59   60   61   62   63   64   65   ...   664
Байланысты:
ющук

IIIIIIIII
Термическая денатурация ДНК (30-40 с при 93-95 °С)

Отжиг праймеров-олигонуклеотидов, запускающих синтез ДНК
щ ш ш яяш тш тт—
ттт
 
(30-40 с при 93-95 °С)
Т ТТ ТТ Т Т Т Т Т Т Т Т Т Т Т Т м
праймер
и1........... ДЦ
_______ 1
Синтез комлементарных нитей ДНК (70-72 °С) и формирование
ампликона с участием микробной ДНК-полимеразы
■ 1 I I I ■ I ■
Q Q 
а дезоксинуклеотидтрифосфат
1111 I I I I I LI-U 1 1 H I
I
Завершение первого цикла амплификации
ттм м м м м м
Ш 1 М | М | ................. I
После 30-80 циклов амплификации — проведение
идентификации микроба путем ДНК-гибридизации
(определение числа гибридов с помощью различных
тест-систем, в том числе флюорохромных и др.)
Рис. 6.14. 
Принцип и этапы полимеразной цепной реакции
ГЛ
А
ВА
6


Р
А
З
Д
Е
Л
I
8 2
М ЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
Как правило используются наборы праймеров, соответствующие характеру 
инфекционного процесса. Например, для диагностики, вируса используют прай­
меры грамм+кокков и грамм-палочек.
Определять наличие какого-либо микроорганизма в биологическом материале 
можно путем 
рестрикционного анализа.
Данный метод основан на применении 
ферментов, носящих название рестриктаз и позволяющих распознавать микроор­
ганизмы определенного вида.
Принцип метода заключается в том, что в геноме микробов одного вида нахо­
дится строго определенное (генетически детерминированное) число участков 
узнавания для определенной рестриктазы. В настоящее время из различных бак­
терий выделено и очищено более 175 различных рестриктаз, для которых извест­
ны сайты узнавания. Если выделенную из конкретного микроба ДНК обработать 
определенной рестриктазой, то это приведет к образованию строго определенного 
количества фрагментов ДНК фиксированного размера.
Размер каждого типа фрагментов можно узнать с помощью электрофореза в 
агарозном геле: мелкие фрагменты перемещаются в геле быстрее, чем более круп­
ные фрагменты, и длина их пробега больше. Гель окрашивают бромистым этидием 
и фотографируют в ультрафиолетовом излучении. Сопоставляя полученную карту 
рестрикции ДНК с образцами видовых рестрикционных карт, можно выявить при­
надлежность анализируемого возбудителя к определенному виду или роду — даже 
такому, который находится за рамками предположений клинициста.
Еще один способ генетического анализа — 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   58   59   60   61   62   63   64   65   ...   664




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет