Руководство Инфекционные болезни Главные редакторы акад. Ран н. Д. Ющук, акад. Раен ю. Я. Венгеров
Высокопроизводительное секвенирование ампликонов
жүктеу/скачать 31,6 Mb. Pdf көрінісі
|
ющук
- Бұл бет үшін навигация:
- МАЛДИ-масс-спектрометрию.
| Высокопроизводительное секвенирование ампликонов
используется для исследования видового состава прокариот в материале от больного путем иссле дования высококонсервативных участков генома, в частности гена 16S рРНК. В составе этого гена есть консервативные и вариабельные участки. В процессе исследования с помощью консервативных участов распознают ДНК бактерий, а вариабельные участки накапливают и идентифицируют в них последовательности, характерные для определенного вида бактерий. Метод позволяет устанавливать всю совокупность бактерий, присутствующих в исследуемом материале. Все описанные способы генетического анализа обладают очень важным преи муществом перед остальными методами — они позволяют выявлять даже те виды микроорганизмов, которые невозможно культивировать ни одним из описанных выше способов. ПРОТЕОМНЫЙ АНАЛИЗ Методы молекулярного, в том числе протеомного, анализа начали активно раз виваться еще в начале 90-х гг. прошлого столетия. Исследование совокупного белкового состава (протеома) биологических жид костей осуществляют, в частности, используя соотношение массы отдельных белков к их заряду. В настоящее время все чаще для этих целей применяют времяпролетную матрично-активированную лазерную десорбцию/ионизацию — МАЛДИ-масс-спектрометрию. При туберкулезе, менингитах различной этио логии, микозах, ЦМВИ, инвазивной стрептококковой инфекции протеомные исследования рекомендуются для идентификации организмов по совокупности присущих им белков. Принцип масс-спектрометрии и его использование в инфекционной практике значительно отличаются от любых других диагностических приемов (рис. 6.15). Дело в том, что диагноз в данном случае ставится не только по обнаруже нию каких-то определенных белков микроорганизма или в организме больного человека, а по совокупности и соотношению белковых профилей биологическо го материала в целом. В результате прибором выдается протеомный профиль, например, СМЖ. Зная таковой у здорового человека (рис. 6.15, А), можно путем его сравнения с помощью специальных компьютерных программ с протеомным профилем больного (рис. 6.15, В) поставить диагноз менингита. Помимо общей протеинограммы методом масс-спектрометрии можно определять и конкретные белки в составе протеинограммы. ЛИПИДНЫЙ АНАЛИЗ Липидный анализ имеет более ограниченное применение в инфекционной практике. Так, например, при диагностике инфекционных заболеваний, вызван ных анаэробными бактериями, значительную помощь в определении видовой принадлежности возбудителей может оказать метод газо-жидкостной хроматогра фии (рис. 6.16). Суть этого метода, используемого с указанной целью, заключается в том, что каждому виду анаэробных бактерий присущ свой уникальный набор образуемых ими жирных кислот. При этом каждая жирная кислота обладает специфичной для нее точкой перехода из жидкой в газообразную фазу. Прибор для газо-жидкостной хроматографии как раз и фиксирует эту точку перехода, благодаря чему становит- ГЛ А ВА 6 Р А ЗД ЕЛ I 8 4 М ЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Б е л к и в с о с т а в е б и о л о ги ч е ск о го м а т е р и а л а (и сто ч н и к ионов) Магнитное (электрическое) поле жүктеу/скачать 31,6 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|