Руководство Инфекционные болезни Главные редакторы акад. Ран н. Д. Ющук, акад. Раен ю. Я. Венгеров



Pdf көрінісі
бет63/664
Дата26.12.2023
өлшемі31,6 Mb.
#199567
түріРуководство
1   ...   59   60   61   62   63   64   65   66   ...   664
Байланысты:
ющук

молекулярная гибридизация,
методически основанная на способности двухцепочечной ДНК при повышенной 
температуре (90 °С) в щелочной среде денатурировать, т.е. расплетаться на две 
нити, а при понижении температуры на 10 °С вновь восстанавливать исходную 
двухцепочечную структуру. Для проведения молекулярной гибридизации иссде- 
дуемую ДНК расплетают указанным выше способом, одну нить фиксируют на 
специальном фильтре, который затем помещают в раствор, содержащий радио­
активный зонд.
Зондом называется одноцепочечная молекула нуклеиновой кислоты опреде­
ленного вида микроорганизма, меченная радиоактивными нуклидами, с которой 
сравнивают исследуемую ДНК. Когда создаются условия для восстановления двух­
цепочечной структуры ДНК, зонд в случае наличия комплементарности между 
ним и исследуемой ДНК способствует образованию двойной спирали. Это позво­
ляет выявить степень соответствия ДНК определяемого микроорганизма струк­
туре зонда, что позволяет точно идентифицировать возбудителя инфекционного 
заболевания.
Принцип 
риботипирования
основан на том, что последовательность нукле­
отидных оснований в оперонах, кодирующих рибосомальную РНК (рРНК), 
отличается консервативностью, присущей каждому виду бактерий. Эти опероны 
представлены в бактериальной хромосоме в нескольких копиях. Количество и 
локализация копий оперонов рРНК варьируют в ДНК различных видов бактерий. 
Это свойство позволяет производить исследование выделенных штаммов на число 
копий оперонов и определять их вид. В настоящее время риботипирование прово­
дится в автоматическом режиме в специальных приборах.
Опосредованная транскрипцией амплификация рРНК
используется для 
диагностики смешанных инфекций. На первом этапе проводится амплифика­
ция (накопление) рРНК на матрице, выделенной из исследуемого материала 
ДНК при помощи ДНК-зависимой РНК-полимеразы. Далее проводится гибри­
дизация накопленного пула рРНК с видоспецифическим олигонуклеотидами, 
меченными флюорохромом или ферментами. Исследование проводится в 
нескольких пробах соответственно тем видам микробов, наличие которых 
предполагается в составе биологического материала от больного. На заклю­


ЛАБОРАТОРНЫЕ М ЕТОДЫ 
8 3
чительном этапе определяются продукты гибридизации методами иммуноф­
люоресценции или ИФА. Реакция осуществляется в автоматическом режиме в 
установках, которые позволяют проводить одномоментное определение рРНК 
различных видов бактерий.


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   59   60   61   62   63   64   65   66   ...   664




©engime.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет