С. В. Кожанова Жалпы иммунология
Лейкоциттердің миграциясын тежеуші реакция (ЛМТР)
жүктеу/скачать 19,87 Mb. Pdf көрінісі
|
Жалпы иммунология оқулық
| Лейкоциттердің миграциясын тежеуші реакция (ЛМТР).
ЛМТР әр түрлі жұкпалы ауруларда (негізінен жасушаішілік бактериялармен закымданғанда): туберкулез, бруцеллез, лепра; кандидоз және со- зылмалы вирусты жұкпаларда иммундык жауабын; сонымен катар аллергиялык ауруларда аллергендерге сезімталдығын аныктау үшін та- бысты колданады. Әдістің қағидасы. Эритроииттер коспасы жок кан плазмасынан алынған лейкоциттер коспасын, (50 мкл) 199-ортамен (бакылауда) және индукциялы варианты — ФГА-мен бір көлемде араластыра- ды. ФГА концентрациясы 1 мл-де 10 мкг. Осы серпілістің бірнеше модификациясы бар. Иммунологиялык серпіліске арналған планшетке, дуплетке немесе триплетке 10% бұзаудын эмбриондык белсендірілген сарысуы косылған 199-ортасын кұяды. Мөлшері 7 мм және диаметрі 1 мм капиллярды ортасы бар лейкоциттер коспасымен немесе ФГА-мен толтырады. Бір жағын аракатынасы 1:3 тен парафин және воск коспасымен толтырады, екінші жағын — планшеттін ұясына түсіреді. Планшетті какпақпен жабады, 18—24 сағатка 37 °С инкубациялайды. Капиллярды алып тастағаннан кейін сұйыктыкты ойыктарда қайтадан суспензиялайды. Әр ойыкта лейкоциттердін санын Горяев камерасымен есептейді. ФГА-мен бакылау және сынак үшін орташа санын есептейді. Миграция индексін есептеу үшін тәжірибедегі жасушалардың концентрациясын бакьшаудағы сондай концентрацияға бөледі. Қалыпты жағдайда арақатынасы 0,3—0,5 тең. Капиллярлық әдіс. Бөлінген лейкоциттермен бір жағы ашык, ал екінші жағы жабылған 2 капиллярды толтырады. Кейін центрифугада айналдырады және жасушалары жок тұнбаны алып тастайды. Содан соң бір капиллярға ынталандыруды (ФГА) косады және 24 сағат бойы 37 °С инкубациялайды. Бакылау және тәжірибе капиллярынын ашык жағынан планшеттін ұясына лейкоциттердін миграциясы жүреді. Серпілісті бақылау және тәжірибе ұяларындағы жасушалар концентрациясының аракатынасымен бағалайды. Калыпты жағдайда аракатынасы 0,6—0,87 тен (миграция индексі). 2 3 -Т а р а у . И м м у н д ы қ д и а г н о с т и к а п р и н ц и п т е р і м е н ә д іс т е р і 527 В-ЛИМФОЦИТТЕРДІҢ ФУНКЦИОНАЛДЫ БЕЛСЕНДІЛІГІН БАҒАЛАУ Қан сарысуындағы және баска да биологиялык сұйыктыктагы иммуноглобулиндердің әр класыныңжәне подкласының (изотиптердің) конпентрациясы В-лимфоциттердің және де барлык гуморалдык им- мунды жауаптың реттелу жүйесінің функционалдык жарамдығын көрсететін негізгі интегралды көрсеткіш болып табылады. Иммуноглобулиндердің әр класынын (І§А, І§С, І§М, І§Е) мөл- шерін аныктайтын аспаптары ретінде әр класына тән арнайы анти- иммуноглобулинді антидене болып табылады. Әдеттегідей сарысулык иммуноглобулиндердің концентрация- сын поликлондык антиденелерді колдану аркылы, Манчини бойын- ша гельдегі радиалдық иммунды диффузия эдісімен аныктайды. Соңғы кездері иммуноглобулиндерін әр класына тән, әр түрлі антигендік детерминантка (эпитоп) карсы колданатын моноклонды антиденелер- ге көңіл бөледі. Манчини эдісінің қағидалары. Зерттелетін сарысуларды стандарт- тык концентрациядағы І§М, І§С, І§А карсы антиденелі сарысула- ры бар агар ойыктарына кұяды. Зерттелетін сарысу кұрамындағы иммуноглобулиндер агарға диффуздайды және сәйкес антидене- лермен байланысып, преципитация сақинасын түзеді. Ойыкта антигендердің артыкшылығы сакталғанша, преципитация сақинасының диаметрі үлкейе калыптаса береді. Преципитация сақинасының соңғы мөлшері сәйкесті иммуноглобулиннің концен- трациясына пропорционалды болады. Манчини әдісі 10 мкг/мл тең иммуноглобулиндердің концентрациясын анықтай алады. Әдістің кателігі 10% күрайды. ТУА БІТКЕН ИММУНИТЕТТІҢ БҰЗЫЛЫСТАРЫН ЛАБОРАТОРИЯЛЫҚ БАҒАЛАУ Туа біткен иммунитеттін бұзылыстарын диагносткалау үшін негізі нейтрофилдердің фагоциттік және метаболизмдік белсенділігін аныктайтын әдістер мен комплемент жүйесінін жағдайын бағалайтын әдісті кодцанады. 528 IV Бөлім. Иммунды патология және иммунды профилактика жүктеу/скачать 19,87 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|