СӘ 1 Кортикалды тимоциттер

520
IV Б ө л ім . И м м у н д ы п а т о л о г и я ж ә н е и м м у н д ы п р о ф и л а к т и к а
23.5-кестенің соңы
Антиген
Аныкталатын жасушалар
СЭ 16
КК-жасушалар, моноциттер, гранулоциттер
СӘ 17
Гранулоциттер, моноциттер, тромбоциттер
СИ 18
Лейкоциттер
СИ20
В-лимфоциттер
СИ21
В-лимфоциттер
СИ22
В-лимфоциттер
СЭ24
В-лимфоциттер, гранулоциттер
СЭ25
Интерлейкин-2-ге рецептор
СИ45 КА
В-лимфоциттер, Т- лимфоциттер (40%), МК-жасушалар
СИ50
Лейкоциттер
СЭ 54 (ІСАМ-1)
Цитокиндер белсендірген эндотелий және баска жасу-
шалары
СЭ 56 (Ы-САМ)
МК-жасушалар, кейбір Т-лимфоциттер
С 0 71
Трансферринге рецептор
СӘ72
В-лимфоциттер
СИ 95 (ҒА5)
Апоптозға дайын жасушалардың маркері
(ҒА5 — рецептор)
ИММУНДЫ ФЛЮОРЕСЦЕНТТІК СЫНАМАДА 
ЖАСУШАЛАРДЫ БОЯУ ӘДІСТЕРІ
1. Лимфоциттерді верографин (урографин) — фиколл градиентінде 
центирфугалаған (айналдырған) (тығыздығы 1,077 г/мл) (Воуигп, 
1968) гепаринденген веноздык каннан бөліп алады.
2. Лимфоциттерді центрифугалык пробиркаға немесе 96-ойыктык 
планшетке 50 мкл көлемде 1 мл-ге 2 млн мөлшерде енгізеді. 
Жасушаларға 5 мкл сынамалайтын моноклонды антиденелер 
ерітіндісін косады және +4 °С 30-45 мин инкубациялайды.
3. 150 мкл Хенкс ерітіндісін косып, 200§ 5 мин айналдырады.
4. Супернатантты алып тастайды. Содан соң 50 мкл Хенкс ерітін- 
дісін енгізеді, жасушаларды суспензиялайды, 150 мкл Хенкс 
ерітіндісін косып, 200§ 5 мин айналдырады.
5. Супернатантты алып тастайды. Жуылған жасушалардын тұн- 
басына тышкан 1§-не ФИТЦ белгіленген және 1:100 сұйыл-

2 3 -Т а р а у . И м м у н д ы қ д и а г н о с т и к а п р и н ц и п т е р і м е н ә д іс т е р і
521
тылған кой антиденелерінің 50 мкл Ғ(аЬ)2-фрагментін косады. 
Еріту үшін құрамы 0,5% желатиннен және 0,1% натрий азидінен 
тұратын, фосфатпен буферленген (РВ5) (РВ8 Хенкс ерітіндісін 
колдануға болады) физ. ерітіндіні колданады. Жасушаларды 
суспензиялайды және +4 °С 30 мин инкубациялайды.
6. 3 -4 тармакта көрсетілгендей жасушаларды 2 рет жуады.
7. Жасушалар иммунды флюоресценциямен карауға дайын, бірак 
сынаманың нәтижесін бірнеше сағаттан сон алатын болсак, онда 
жасушаларды бекітеді. Ол үшін сонғы рет айналдырған және 
супернатаны алып тастағаннан кейін жасушалар тұнбасына РВ8- 
ке (РВ5-ке 1:40 сұйьштылған формалин ерітіндісін колдануға 
болады) 50 мкл 1% параформальдегидті косады. Жасушаларды 
суспензиялайды. 
Бекітілген 
жасушалар 
флуоресценциясын 
бірнеше апта бойы сактайды.
Боялған жасушаларды ағымды цитофлуориметрде талдайды не- 
месе флуоресценттік микроскоп аркылы карайды. Соңғы жағдайда 
жасушаларды суспензиялайды, суспензияны заттык әйнекке ауысты- 
рады, жабынды әйнекпен жабады және препаратты флуоресценттік 
микроскоппен (*90 объектив) иммерсия астында карастырады. 
Суреттін сапасын жоғарылату үшін окулярдың аздаған үлкейткіштігін 
(хЗ немесе х 1,7) қолданады. Флуоресценттік емес иммерсиялык 
майды колданған жөн. Бақылауды караңғы бөлмеде жүргізген дұрыс. 
Теріс бакылау препаратында бакыланатын антиген-позитивтік 
жасушалардың санын, 200 лимфоциттерді карағанда флуоресцентті 
жасушалардың %-ын алып тастағанда, флуоресценттік жасушалардын 
%-дык ретін аныктайды. Теріс бакылау ретінде, сол бойынша ұксас 
дайындалған, бірак моноклонды антиденелердін орнына жасушалар- 
ды Хенкс ерітіндісімен немесе калыпты тышкан 1§-мен өңделген пре- 
параттарын колданады.
ИММУНДЫҚ ТАЛДАУ ӘДІСТЕРІ
Казіргі кезде антигендік касиеті бар және зерттелу материалын- 
да өте аз концентрациялы болатын әр түрлі молекулаларды сандык 
түрінде иммундык талдау әдістерімен — радиоиммунды талдау 
(РИТ) және иммундыферментті талдаумен (ИФТ) аныктауға болады. 

жүктеу/скачать 19,87 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: