Полимеразды тізбекті реакция - белгілі бір ДНҚ фрагменттерінің санын көбейту тәсілі
ДНҚ - сақтау құралы ретінде
ПТР - ДНҚ фрагменттерінің санын «көбейту» тәсілі
Баспа мәтіні сақтау құралы ретінде
Фотокөшіру - мәтін көшірмелерінің санын «көбейту» тәсілі
ПЦР-ға дейін
ПЦР-дан кейін
ДНҚ-ныі 1 көшірмесі
10¹º-10¹² ДНҚ фрагментінің көшірмесі
Полимеразды тізбекті реакция
ПТР - үш кезеңнен тұратын циклдің бірнеше қайталануы:
а) Денатурациясы (балқуы), оны қыздыру арқылы екі тізбекті бір тізбектіге айналдыру;
б) Ренатурациясы- ажырап болған тізбектерді қайта қалыптастыру (қалпына келтіру);
в) Тізбектің синтезі - ДНҚ тізбегіне қосымша матрицалық тізбекті синтездеу.
Амплификация реакциясы тікелей хромосома препараттарында таңбаланған нуклеотидтердің көмегімен жүзеге асырылады, хромосомалардағы амплификация өнімдерін толықтыратын ДНҚ аймақтарын анықтауға мүмкіндік беретін - PRINS әдісі.
ПТР нұсқалары бар:
а) асимметриялық ПТР - олигопримерлердің біреуінен артық болғанда;
б) магниттік бөлшектерді қолданып, стрептавидиннің беткейінде фиксацияланған және олардың праймерлерінің біреуінің биотиндік жапсырмасы. Олар көбінесе бір тізбекті ДНҚ фрагменттерінің синтезі мен оқшаулануына мүмкіндік береді, бұл олардың секвинерленуін жеңілдетеді.
Образование нуклеотидной цепи осуществляется ферментом ДНК-полимеразой. В качестве площадок выступают "праймеры" (затравки) - синтетические олигонуклеотиды длиной 15-20 нуклеотидов. Праймеров должно быть два (прямой и обратный), они комплементарны участкам ДНК-матрицы и именно фрагмент ДНК, ограниченный праймерами, будет многократно копироваться ДНК-полимеразой. Работа полимеразы заключается в последовательном добавлении нуклеотидов, комплементарных последовательности ДНК-матрицы. Тем самым в одном температурном цикле вновь синтезируется два новых фрагмента ДНК (т.к. молекула ДНК - двуцепочечная, то и матриц изначально две). Таким образом, за 25-35 циклов в пробирке накапливаются миллиарды копий участка ДНК, определенного праймерами.
Бірінші цикл
Екі тізбекті ДНҚ молекуласы түзіледі
Екінші цикл
ДНҚ-ның төрт молекуласы түзіледі
Үшінші цикл
ДНҚ-ның сегіз молекуласы түзіледі
Хромосомалық ДНҚ-ның фрагменті
ДНҚ-ның бөлшектенген тізбегі және оған қосылған праймерлер
ДНҚ синтезі
ДНҚ-ның бөлшектенген тізбегі және оған қосылған праймерлер
ДНҚ синтезі
ДНҚ-ның бөлшектенген тізбегі және оған қосылған праймерлер
