Генетикадағы диагностикалық әдістер «Биологиялық аурулар негіздері»

Саузерн-блот гибридизация

• Блоттинг (blotting-сулау) - бұл гель электрофорезімен бөлінген макромолекулалардың (ДНҚ, РНҚ немесе ақуыз) фрагменттерін қатты субстрат - мембранаға беру. Адам геномын зерттеуде көбінесе өңдеудің блоттинг әдісі қолданылады, Сузернмен жасалған олигонуклеотидті зонд ерітіндідегі мембранаға адсорбцияланған ДНҚ-мен гибридизациялайды. Геномдық ДНК (әдетте ақ қан клеткаларынан немесе ұрық жасушаларынан бөліп алынған) қысқа фрагменттерге бөлініп, агарозды гельге бөліп, мембранаға өткізіледі, содан кейін олигонуклеотидті зондтармен гибридизация арқылы нақты аймақтар анықталады. Бұл әдіс арқылы ДНҚ-ның ерекше бөліктерін анықтайды, олардың мөлшері геномның миллионнан бір бөлігін құрайды

• ДНҚ-ның Блот-гибридизациясы

• Гелмен бояу
• Фотоға түсіру

• Агарозды гельде рестрикация және электрофорез

• Фитиль

• Шыны пластинка

• 2MNaCl pH 7,0 буферлі құрамды кювета

• Төсеніш

• Жүк

• Нитроцеллюлоза

• Сүзгілі
• қағаз

• Ылғалды сүзгілі қағазға гельды орналастырады (екі пластинка арасына төсеніш салады)

• Бейтараптандыру (гельді IM трис,pH 5,5 2MnaCl жуады)

• ДНҚ бөлшектерінің денатурациясы (гельді спиртпен жуады, 0,5М NaOH ;1,5 M NaCl)

• Гельге нитроцеллюлозды пленка қояды, үстінен сүзгілі қағаз оның үстінен жүкпен бастырады