Ф-әД-001/046 Қазақстан Республикасы Білім және ғылым министрлігі
Ферменттердің субстратты ерекшелігі
жүктеу/скачать 0,63 Mb. Pdf көрінісі
|
Биохимия лаб 4
- Бұл бет үшін навигация:
- Себебі: сілекейдегі амилазаның активтілігін сандық түрде анықтау энзимодиагностикаға мысал болады. Қажетті құрал-жабдықтар
- Жұмыс орындалу реті
| Ферменттердің субстратты ерекшелігі.
1. Сілекейдегі амилазаның активтілігін сандық түрде анықтау. Лабораториялық жұмыстың мақсаты: Ферменттердің субстратты ерекшелігі – ферменттердің белгілі бір субстратқа немесе субстраттық ұқсас тобына әсері және белгілі бір байланыстары бар. Сілекейдегі амилаза крахмалды гидролиздеп аралық өнімдерідекстриннен мальтозаға дейін ыдыратып содан кейін сілекейдегі мальтозаның әсерімен екі молекула глюкозаға ыдырайды. Себебі: сілекейдегі амилазаның активтілігін сандық түрде анықтау энзимодиагностикаға мысал болады. Қажетті құрал-жабдықтар: стакан, пробирка шыны таяқшасы Реактивтер: 1. 0,1%-тік крахмал ертіндісі 2. 0,1%-тік люголь ерітіндісі Принципі: сілекейдегі амилаза крахмалды гидролизге ұшыратып аралық өнім декстриннен малтозаға дейін ыдыратады, содан сілекейдегі малтозаның әсерінен гликозаның 2 молекуласына ыдырайды. Белгілі бір уақытта крахмалдың мөлшерінің азаюына байланысты амилазаның активтілігін анықтауға болады. Амилазаның активтілігі дегеніміз крахмалды түгел аяғына дейін ыдырату үшін сілекейдегі ең көп сұйылту мөлшері крахмал иодпен әрекеттесе отырып көк түсті комплекс түзеді. Ал декстрин иодпен күлгін түстен сары түске дейінгі ертінділер береді. Крахмалдың толық ыдырағанын түсінен білеміз. Сілекейдің амилазалық активтілігін 0,1%-ті крахмал ертіндісінің миллилитр саны көрсетеді. Белгілі бір жағдайларда 1 мл сұйытылмаған сілекейді ыдыратады. Қалыпты жағдайда сілекейдегі амилазаның активтілігі 320-640 бірлікке тең. Жұмыс орындалу реті: 1. сілекейдің жұмыс істейтін ертіндісін дайындау 1 мл сілекейге 9 мл дистилденген су құйып жақсылап аралыстырады (сілекейді сұыйлту 10 -1 =1/10 болады). 2. сілекейді әр түрлі араластыру арқылы сұйылту 10 номерленген пробиркаға бюреткадан 1 мл дис. су құяды содан соң 1-ші пробиркаға 1 мл алып 2- ші пробиркаға қосып араластырады, одан 1 мл алып, 3- ші пробиркаға қосады, осылай 10- шы пробиркаға дейін 10- ші пробиркадан 1 мл ертіндіні алып төгіп тастайды. Сонымен сілекейді көрсетілген 10 пробиркада сұйылту мынаған тең 10 -1 ∙ 2 -n = n 2 10 1 N- сәйкес пробирканың номері. 1. 3. 10 пробиркадан бастап барлық пробиркаға 1 мл ден 0,1%-ті крахмал ертіндісін қосамыз. 2. барлық пробирканы 20 мин 45с су моншасында ұстайды. 3. пробиркаларды суытады. Содан олардың әр қайсысына 1 тамшыдан люголь ертіндісін қосып араластырады. 4. шыққан нәтижені таблицаға толтырады. Пробирка № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Сілекейді сүйылту 1 20 1 40 1 80 1 160 1 320 1 640 1 1280 1 2500 1 5120 1 10240 Люголь ертіндісін қосқаннан кейінгі ертіндінің түсі сілекейдегі амилазаның активтілігін есептеу. Сілекейдегі амилазаның активтілігі сілекейді сұйылту шамасына кері шама: А = n 2 10 1 1 = 10 · 2 n бірлік n- крахмал толық ыдыраған соңғы пробирканың номері (сары түсті). жүктеу/скачать 0,63 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|