Сандық цитохимия әдістері
жүктеу/скачать 68,84 Kb.
|
Дәріс 1-15 Сандық цитохимия әдістері
| Липидтер
Липидтерді өңдеу үшін көбінесе липидтердің физикалық қасиеттерін өзгерте алатын (еріту, дисперсия, алғашқы флуросценция және т.б.) формальдегитдер пайдаланылады. Өңдеу кезінде липидтердің шайылуы және біртіндеп еруі мүмкін, әсіресе фосфолипидтер, липидтер мен белоктардың арасындағы комплекстердің қалыптасуын тудыратын электролиттер болатындықтан Ca, Co,немесе Cd өңделетін иондардың қоспасын азайтуға болады. Соған байланысты құрамында формальдегид және кальцийі бар Бейкер өңдеуіш қоспасы липидтердің гистохимиясында кеңінен қолданылады. Карбовакс немесе этиленгликоль бар өңдеуішке сіңірілу процесінде ұлпаны құю кезінде, липидтерді формальдегидпен өңдеу барысында барынша липидтердің еруін тудырады. Басқа да липидтерді әсіресе фосфолипидтерді шаюдың басқа да мүмкіншілігтері парафинге құю барысында пайдаланатын органикалық ерітінділерде өңдеуде бихромат қоспасын қосу болып саналады. Жоғары температурада ұзақ хромдалу прафинге құю кезінде нейтральді майларпдың сақталуын қамтамасыз етеді. Жалпы липидтерді формальдегидпен өңдеу кезіндегі толықтырулар бихроматтар және сулема ерітіндісінің қоспасында ұлпаларды өңдеу болып табылады. Ферменттер Ең алғашқы кезден-ақ , гидролитикалық ферменттерді гистохимиялық бөліп алу үшін өңдеуге суық ацетон немесе этанолды алғын, себебі бұл екі сұйықтық та ферменттердің біршама ғана инактивациясын тудырады. Келесі парафинге құю кезінде сіңірілу процесі құю температурасына қарағанда ферменттің активтілігіне аз деңгейде әсер етеді. Гистохимиялық бөлінетін активтілік кейбір гидролитикалық ферменттерде, әсіресе фосфотаза құю кезіндегі температура +50 0С-тан төмен болмағанда, парафинге сіңірілу 30 мин (вакуумға құю кезі) уақытта өтеді. Гидролитикалық ферменттердің активтілігінің қанағаттанарлықтай сақталуы - 7,5 % - тік сахароза қосылатын, забуференді формалин (4%) қоспасында ғана болады, содан кейін сахароза мен гуммиарабиком қоспасында өңделеді. Цитохромоксидаза активтілігінің жақсы сақталуы тек мұздату-құрғатылу өңдеу әдісінде ғана болады. Сукцинатдегидрогеназа суық ацетонда да жақсы реттеледі. Еритін және байланысқан дегидрогеназаларды формальдегидтің төмен концентрациясында (0,7-2%) қңдеу кезінде реттеуге болады. Еритін дегидрогеназалардың реттелуі сонымен қатар жалғастырылмайтын өңдеу кезінде глутаральдегидтің забуференді ертінідісінің көмегімен жүзеге асуы мүмкін. Ферменттерді ультраструктуралық зерттеулер кезінде өңдеу үшін моно- және диальдегидтердің маңызы өте зор. Біршама инактивирлеу қасиет глиоаксальда болады, оксиадипинальдегид немесе адипинальдегид болса, онда 6%-дық глутаральдегид өткір инактивация тудырады. Осылайша, глутаральдегидтің көмегі арқылы құрылымының жақсы сақталуы ферменттік активтілік шығынымен сипатталды. Глутаральдегид концентрациясын 1,5 - 3%-ға дейін төмендету арқылы инактивация деңгейін азайтуға болады. Моноальдегидтер–метакролеин, кротанальдегид және акролеин - электронды-гистохимиялық деңгейдегі феорментативтік активтілікті бөліп алу кезінде әсер етуі онша маңызды емес. жүктеу/скачать 68,84 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|