Составляющие элементы днк-микрочипа
Изготовление ДНК-микрочипа
жүктеу/скачать 35,47 Kb.
|
ДНК-микрочипы
- Бұл бет үшін навигация:
- 1.4 История разработки микрочипов. Методика Саузерн-блоттинг.
- 1.5 Принцип работы микрочипа.
| 1.3 Изготовление ДНК-микрочипа.
Микрочип изготавливается из стекла, силикона или пластика. ДНК наносится на него методом машинной микропечати и химической пришивки в виде множества упорядоченных точек, каждая из которых содержит равное количество синтезированных ДНК-зондов. Существуют также миниатюрные шарики, которые используются для крепления зондов. Современные ДНК-микрочипы могут одновременно измерить экспрессию1 десятков тысяч генов у человека и выявить около миллиона мутаций. [1. https://ru.wikipedia.org/wiki/ДНК-микрочип] [2. http://thesaurus.rusnano.com/wiki/article813] [3. http://bio-met.ru/dnk/52-dnk-mikrochip.html] 1.4 История разработки микрочипов. Методика Саузерн-блоттинг. Разработка микрочипов была выделена из методики Саузерн-блоттинг. Эта методика состояла в том, что фрагменты генетического кадрирования переносили на твердый носитель и впоследствии с его помощью определяли последовательности нуклеотидов, которые содержатся в этом образце. В 1987 году генетический шифр впервые был объединен в чип. В этом же году были поставлены первые эксперименты об определении экспрессий геномов в регуляции. Первые опыты проводились с помощью интерферонов молекулы. Ранее вместо твердой поверхности использовалась фильтрованная бумага, на которую наносилось микроскопическое количество ДНК с помощью метода раскапывания. [1. https://ru.wikipedia.org/wiki/ДНК-микрочип] [2. https://testdnk.pro/informacia/chipy-dnk.html] 1.5 Принцип работы микрочипа. Принцип работы микрочипа для изучения экспрессии генов состоит в следующем: активная работа гена в данной ткани выражается в накоплении его матричной РНК (мРНК). Все мРНК экстрагируются (извлекаются) из образца ткани, и с помощью фермента обратной транскриптазы на них синтезируется так называемая комплементарная ДНК (кДНК), которая значительно устойчивей и удобней в работе, чем мРНК. Полученный набор кДНК метят с помощью флуоресцентных или радиоизотопных меток. Содержание индивидуальных кДНК в образце прямо пропорционально содержанию их мРНК-матриц и, следовательно, уровню активности соответствующих генов. Смесь кДНК наносят на микрочип, в каждой точке которого пришиты ДНК-фрагменты, соответствующие кодирующей последовательности одного из генов. Комплементарные ДНК находят «свои» точки и связываются (гибридизуются) с ними по принципу комплементарности. Чем больше в растворе кДНК данного вида, тем больше ее прикрепляется к своей точке. После окончания процесса гибридизации чипы промываются для удаления остатков материала. Затем специальное сканирующее устройство с помощью лазера определяет содержание кДНК в каждой точке микрочипа, а программа соотносит его с названием гена, представленного данной точкой. Результатом ДНК-микрочипового исследования является матрица из точек, интенсивность которых прямо пропорциональна активности соответствующих генов. [1. http://www.machinelearning.ru/wiki/index.php?title=ДНК-микрочип] [2. https://ru.wikipedia.org/wiki/ДНК-микрочип] [3. http://thesaurus.rusnano.com/wiki/article813] [4. DNA Chip Technology / Office of Science Education and Outreach: Research Technique Fact Sheets URL: http://www.genome.gov/DIR/VIP/Learning_Tools/Fact_Sheets/dna_chip.html] [5. Ke Y., Stuart L., Yung C., Yan L., Hao Y. Self-assembled water-soluble nucleic acid probe tiles for label-free RNA hybridization assays.// Science – № 5860 (319), 2008 – P.180-183] [6. http://bio-met.ru/dnk/52-dnk-mikrochip.html] жүктеу/скачать 35,47 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|