Антигенный состав опухолевых клеток
жүктеу/скачать 100,53 Kb.
|
иммунка 2 ответы на вопросы (1)
- Бұл бет үшін навигация:
- Тх2 и CD4+25+FoxР3+регуляторные Т-лимфоциты.
| МЕХАНИЗМ АЗКЦТ
Молекула 1gG связывается своими Fab-фрагментами с антигенными детерминантами поверхности опухолевых клеток, а Fс-фрагмент с Fc-рецепторами NK-клеток. Через рецепторы NK-клетка активирует и секретирует ряд медиаторов, в частности, фактор некроза опухоли (TNF-a), а также перфорин, которые повреждают мембрану опухолевых клеток и вызывают их гибель в результате апоптоза. Клетки врожденного иммунитета, такие как эозинофилы, нейтрофилы и макрофаги, которые имеют соответствующие Fc-рецепторы, также могут участвовать в АЗКЦТ 3. Клеточные механизмы противоопухолевого иммунитета. Роль Т-клеток в противоопухолевом иммунитете, механизм их работы . Главную роль в т-клеточном противоопухолевом иммунитете берут на себя клетки как адаптивного, так и врожденного иммунитета, особенно Т-лимфоциты, макрофаги и NK-клетки. Из Т-лимфоцитов - это Тх1 и CD8+(ЦТЛ). Тх1 распознают опухолевый антиген с антигенами HLA II класса на поверхности АПК (макрофаги или ДК), они начинают синтезировать цитокины, которые ведут к активации механизмов адаптивного клеточного противоопухолевого иммунитета. Через ИЛ-2 и ІFN-g Тх1 индуцируют пролиферацию и дифференцировку самих Тх1, CD8+ЦТЛ и NK-клеток. Так же Тх1 выделяет TNF-b и TNF-a - приводящие к апоптозу раковых клеток. Так же есть IFN-g - противоопухолевый, антипролиферативный интерферон, активатор макрофагов, Т-лимфоциты и NK-клетки. Она выделяется Тх1, CD8+ЦТЛ и NK-клетками. Активацию макрофагов так же может вызвать Тх1 своим макрофаг-активирующим фактором (MAF). CD8+ЦТЛ специфическая цитотоксическая клетка имеющая противоопухолевое действие. Они узнают опухолеспецифические антигены на опухолевых клетках в комплексе с антигенами HLA I класса, активируются и секретируют цитокины, вызывающих гибель опухолевых клеток. Это перфорин, TNF-b (лимфотоксин), IFN-g и ферменты апоптоза – фрагментины. Если перфорина много будет некроз, либо апоптоз опухолевых клеток. Это происходит путем образования в мембранах опухолевых клеток большого числа пор, происходит осмотический лизис клеток, активируются лизосомальные ферменты и начинается воспалительная реакция. Это у нас некроз. Если перфорина мало, то через малое количество пор в клетку поступают фрагментины, и тогда происходит апоптоз опухолевой клетки. Процесс апоптоза усиливается и за счет взаимодействия TNF-b с Fas- рецептором (CD95). У многих злокачественных опухолей экспрессия белков МНС I класса снижена и это ограничивает роль CD8+ЦТЛ в их уничтожении. Так же у опухолевых клеток в дефиците костимулирующие молекулы(СД28И В7), поэтому не возможна активация наивных CD8+ЦТЛ при распознавании опухолевых клеток, и из-за этого наивные CD8+ЦТЛ могут перейти в состояние клональной анергии. 4. Клеточные механизмы противоопухолевого иммунитета. Роль макрофагов в противоопухолевом иммунитете, механизм их работы. Макрофаги, активированные MAF и IFN-g, которые продуцируют Тх1, выделяют TNF-a и IFN-a, лизосомальные ферменты и активные формы кислорода. Тем самым макрофаги вызывают прямое цитотоксическое действие на клетки опухолей. Ему предшествует прямой контакт лектиноподобных рецепторов макрофагов, с гликопротеидами клеточных мембран опухолевых клеток или связывание Fc-рецепторов макрофагов с Fс-фрагментами IgG, на антигенах опухоли (механизм АЗКЦТ – антителозависимой клеточной цитотоксичности). Тем самым макрофаг может повреждать ее с помощью секретируемых им факторов: IFN-a направлен против онковирусов. Кроме того, IFN-a активирует NK-клетки. IFN-a оказывает антипролиферативное действие на опухолевые клетки. ТNF-a осуществляет апоптоз опухолевых клеток и развитие некроза в опухоли. Ему свойственно иммуномодулирующее действие: стимулирует выделение макрофагами ИЛ-1, активации CD8+ЦТЛ и секреции ими IFN-g, активации Тх1, а также активации NK-клеток. ТNF-a - кахектин. Он обладает пирогенным действием и активирует метаболические процессы в организме. Играет роль в патогенезе кахексии у онкологических больных, так как стимулирует катаболизм белков. Клетки, участвующие в реакциях противоопухолевого иммунитета, могут и снижать эффективность защиты организма от опухоли, ингибируя дифференцировку и размножение Тх1, NK-клеток и CD8+ЦТЛ. Ими являются Тх2 и CD4+25+FoxР3+регуляторные Т-лимфоциты. Тх2 через ИЛ-10 и ИЛ-4 ингибируют образование Тх1 и подавляют дифференцировку и активацию макрофагов, NK-клеток и CD8+ЦТЛ, Трег. лимфоциты через ИЛ-10, TGF-β, а также ИЛ-4 тоже так же могут. Возможна также блокада антигенраспознающих рецепторов Т-хелперов с помощью антиидиотипических клонов Т-рег. лимфоцитов. 5) Клеточные механизмы противоопухолевого иммунитета. Роль натуральных киллеров и К-клеток в противоопухолевом иммунитете, механизм их работы NK-клетки распознают опухолевые клетки бе6з МНС- рестрикции. Они распознают с помощью KIR-рецепторов опухолевые клетки, выделяют преимущественно ТNF-α и IFN-g, а также перфорин, тем самым вызывают апоптоз опухолевых клеток и подавляют их пролиферацию. IFN-g также стимулирует дифференцировку Тх1 и эффекторных CD8+ЦТЛ, которые узнают опухолеспецифические антигены на опухолевых клетках в комплексе с антигенами HLA I класса, активируются и секретируют цитокины, вызывающих гибель опухолевых клеток. Это перфорин, TNF-b (лимфотоксин), IFN-g и ферменты апоптоза – фрагментины. Если перфорина много будет некроз, либо апоптоз опухолевых клеток. NK-клетки это первый “барьер” врожденной клеточной противоопухолевой защиты. Они начинают работать на самых ранних этапах развития опухоли. А антигенспецифические CD8+ЦТЛ образуются только на 7-10 день после первичного распознавания антигенов опухоли Т-хелперами. В периферической крови человека в норме 5-7%. Интерфероны (a, b, g) повышают активность NK-клеток, стимулируя, с одной стороны, уже имеющуюся популяцию, а с другой - образование новых NK-клеток. Аналогичным образом действуют на них ИЛ-1 и ИЛ-2. NK-клетки, элиминируют метастазирующие клетки. При синдроме Чедиака-Хигаси и наблюдают большую частоту злокачественных новообразований. Вывод в том что это все из-за характерного им дефицита NK-клеток. 6) Современные методы иммунотерапии рака. Применение интерлейкинов в иммунотерапии рака (ИЛ-1,ИЛ-2,ИЛ-12) Интерлейкин-1. оказывает прямое цитотоксическое действие на опухолевые клетки, он стимулирует также регенеративные процессы в костном мозге, стимулирует индукцию адаптивного иммунного ответа. Под его влиянием повышается также активность NK-клеток, специфическая цитотоксичность моноцитарно-макрофагальных клеток, стимулируется продукция вторичных цитокинов. Все это обусловило попытки применения ИЛ-1 для лечения онкологических больных. ИЛ-1 вызывает также целый ряд нежелательных побочных эффектов, в том числе сильную лихорадочную реакцию. Он обладает также выраженной острой и хронической нейротоксичностью. Все это ограничивает применение ИЛ-1 в онкологической клинике. Интерлейкин-2 эффективен при лечении злокачественных меланом, рака легких, метастатической карциномы почек и других опухолей, когда в ряде случаев была достигнута заметная регрессия. В то же время полное исчезновение опухолей наблюдалось очень редко. Применение высоких доз ИЛ-2 ограничено из-за наблюдавшихся у части больных кардиоваскулярных и почечных токсических эффектов. Наиболее перспективным, по-видимому, является применение ИЛ-2 в методах иммунотерапии ЛАК-клетками, в том числе в комбинации с интерферонами и ИЛ-12. Интерлейкин-12 – цитокин, синтезируемый макрофагами, который обеспечивает важную связь между неспецифическими защитными механизмами и инициацией и развитием Т-клеточного адаптивного иммунного ответа. В частности, индуцируя развитие Т-хелперов-1, ИЛ-12 может увеличивать пролиферацию, продукцию цитокинов и цитотоксическую активность Т-лимфоцитов и NK-клеток. ИЛ-12 стимулирует дифференцировку Т-хелперов-1, которые продуцируют ИЛ-2. Поэтому при одновременном введении они должны действовать синергично, дополняя друг друга в развитии пролиферации и повышении продукции IFN-g Т-лимфоцитами и NK-клетками, что, в свою очередь, повышает их активность. ИЛ-2 также увеличивает экспрессию рецепторов к ИЛ-12 на Т-лимфоцитах и NK-клетках. 7) Современные методы иммунотерапии рака. Применение интерферонов в иммунотерапии рака (IFN-α, IFN-γ). Интерфероны обладают иммуномодулирующим, противовирусным и антипролиферативным действием на опухолевые клетки. Однако спектр их активности у разных типов интерферонов разный. IFN-a обладает более выраженной противовирусной активностью по сравнению с другими типами интерферонов, но у него имеется и отчетливая антипролиферативная активность. Благодаря своей иммуномодулирующей активности IFN-a оказывает выраженное стимулирующее действие на NK-клетки. Поэтому применение препаратов IFN-a дает хороший эффект при лечении целого ряда злокачественных опухолей, в первую очередь, при лечении лейкозов – злокачественных опухолей, ассоциированных с вирусами. По данным ВОЗ применяется IFN-a для лечения метастазирующей злокачественной меланомы. Был хороший результат у больных, получавших IFN-a после хирургического удаления узлов опухоли. В другой работе было показано, что из 30 больных раком кожи, которым IFN-a вводили непосредственно в опухоль и дополнительно проводили аппликацию интерфероновой мази, у 10 больных была получена полная регрессия опухоли, а у 15 - частичная. Клинические наблюдения, проведенные на более чем полутора тысячах онкологических больных с разными формами рака, получавших российский IFN-a (реаферон), подтвердили достаточно высокую эффективность препарата, его безвредность для больных и допустимую реактогенность. IFN-g обладает сильным иммуномодулирующим действием, кроме того, он имеет антипролиферативное действие на некоторые злокачественные клетки, так как стимулирует их к дифференцировке. IFN-g также повышает экспрессию HLA-антигенов I и II класса на клетках многих ви дов злокачественных опухолей, это повышает возможность их распознава ния Т-лимфоцитами. Недавно было показано, что IFN-g может действовать синергически с фактором некроза опухолей, усиливая его цитотоксический эффект. IFN-g при лечении больных со многими видами злокачественных опухолей (рак груди, легкого, яичников, остеогенная саркома), при этом был достигнут хорош. терапевтический эффект. Наиболее выраженным регулирующим влиянием на иммунитет обладает интерферон-у. Иммунотропное действие интерферонов проявляется в активации макрофагов, Т-лимфоцитов и естественных клеток-киллеров. Выпускают препараты естественного интерферона, получаемого из донорской крови человека (интерф ерон, и н терлок), атакж е рекомбинантные интерфероны (реаф ерон, интрон-А , бетаф ерон). Применяют их при опухолевых заболеваниях (при миеломе, лимфоме из В-клеток). Кроме того, в качестве иммуностимуляторов иногда используют так называемые интерфероногены (например, полудан , продигиозан ), повышающие продукцию эндогенных интерферонов 8)Применение моноклональных антител в специфической иммунотерапии рака. Моноклональные антитела получают методом генной инженерии. Вводят эти препараты путем внутривенной инфузии. Целесообразно комбинировать их с другими противобластомными средствами. Побочные эффекты наблюдаются у большинства пациентов. Напр. Трастузумаб, бевацизумаб. Моноклональные антитела используются для специфической “доставки” к опухолевым клеткам различных токсических агентов, которые вызывали бы избирательную гибель только опухолевых клеток. Первой попыткой такого рода было создание иммунотоксинов – моноклональных антител против опухолеспецифических антигенов, ковалентно связанных с молекулами клеточных ядов - дифтерийного токсина или рицина. После расшифровки молекулярного строения и механизма действия этих ядов на клетки учеными были созданы генноинженерные препараты этих токсинов, лишенные рецепторных субъединиц, что исключило возможность их неспецифического действия на нормальные клетки. Специфическая цитотоксичность достигается и при применении противоопухолевых моноклональных антител, конъюгированных с цитостатиками или меченных высокоактивными изотопами, вызывающими лучевую гибель опухолевых клеток. Одним из основных ограничений данного метода является то, что моноклональные антитела, применяемые для иммунотерапии, являются, в основном, мышиными. Они вызывают у человека сильный адаптивный иммунный ответ, поэтому иммунотоксины и радиомеченые препараты на их основе могут вводиться больному лишь однократно, так как при повторном введении образовавшиеся антитела нейтрализуют эти препараты. Выход из этого положения был найден в создании гуманизированных рекомбинантных моноклональных антител, в которых мышиные Fc-фрагменты иммуноглобулинов заменены человеческими. В настоящее время целый ряд фирм разрабатывает способы получения таких опухолеспецифических моноклональных антител и уже проводятся их клинические испытания. Предпринимаются также попытки создать моноклональные антитела, конъюгированные с токсином и радиоизотопом одновременно. Это третье поколение – радиоиммунотоксины. 9) Противоопухолевые вакцины. Виды противоопухолевых вакцин. Вакцины на основе дендритных клеток. Противоопухолевая вакцинация - это способ создания активного специфического противоопухолевого иммунитета в организме с помощью вакцины, содержащей иммуногенные антигены. В Противоопухолевые вакцины могут входить либо целые опухолевые клетки либо только их антигены. различают следующие виды противоопухолевых вакцин: 1. Вакцины на основе опухолевых клеток: · аутологичные; · аллогенные. 2. Антигенные противоопухолевые вакцины: · содержащие белки или фрагменты белков опухолевых клеток; · антиидиотипические вакцины. · вакцины на основе дендритных клеток. -ДНК-вакцины; Вакцины на основе дендритных клеток (ДК-вакцины). Метод их создания. Моноциты периферической крови культивируют in vitro в присутствии ГМ-КСФ, TNF-α и ИЛ-4. Эти три цитокина индуцируют образование дендритных клеток. Потом эти клетки культивируют с различными антигенами (опухолеспецифическими), после чего вводят обратно пациенту. В процессе культивирования ДК поглощают антигены, процессируют их, а затем, при введении в организм, представляют в комплексе с МНС-белками для распознавания Т-хелперам и CD8+цитотоксическим лимфоцитам, индуцируя адаптивный иммунный ответ. Активированные вакцинные ДК продуцируют, ИЛ-12, стимулирующий Тх1-тип адаптивного иммунного ответа. Например: для лечения рака простаты. Было показано, что во всех случаях полученные ДК-вакцины индуцировали генерацию опухолеспецифических цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов. Распознавание и лизис опухолевых клеток-мишеней сопровождались высоким уровнем продукции IFN-γ, который коррелировал с количеством опухолеспецифических CD8+ Т-лимфоцитов, индуцированных с помощью ДК-вакцин. 10) Строение и функции главного комплекса гистосовместимости, его роль в иммунном ответе и реакциях отторжения. Строение и функции главного комплекса гистосовместимости Антигены гистосовместимости - это сложные белки, гликопротеиды, которые содержатся на поверхности всех ядросодержащих клеток организма. У каждого человека имеется свой, индивидуальный набор этих белков. Антигены гистосовместимости и кодирующие их гены образуют систему гистосовместимости. Гены HLA-комплекса локализованы на коротком плече 6-ой хромосомы Он включает в себя 6 локусов (от центромеры): DP, DQ, DR, В, С, А В составе HLA-комплекса выделяют три класса генов, которые обозначаются римскими цифрами. Продукты локусов HLA-A, B, C называют антигенами класса I, а локусов HLA-DR, DQ, DP - класса II. Внутри комплекса HLA находятся также гены, контролирующие синтез различных белков, например, некоторых компонентов комплемента, белков системы пропердина: Bf, C2, C4a, C4b и др.; их обозначают как гены класса III. В каждый локус HLA-комплекса входит множество аллельных вариантов генов, их принято называть специфичностями. локусы А и В, К МНС-генам II класса относятся гены локусов DP, DQ, DR. Среди этих генов, видимо, содержатся гены иммунного ответа (МНС-антигены II класса в большей мере представлены на В-лимфоцитах, макрофагах, дендритных клетках и клетках Лангерганса, а также на активированных Т-лимфоцитах, специализированных эпителиоцитах и др. Кроме важнейшей роли в межклеточном взаимодействии иммунокомпетентных клеток, МНС-антигены II класса играют очень существенную роль в презентации антигенов и индукции адаптивного иммунного ответа, при этом антигенные пептиды, которые презентируются с молекулами МНС II класса, распознаются только субпопуляцией Т-хелперов. К антигенам МНС III класса относятся белки, кодирующие некоторые компоненты комплемента, цитокины семейства факторов некроза опухолей, белки теплового шока, пропердиновый фактор и др. Белки С2 и пропердиновый фактор ,С4 . Основная проблема несовместимости тканей, пусковой механизм трансплантационного иммунитета − это взаимодействие генетически различающихся клеток. Основными антигенами, ответственными за отторжение чужеродных тканей, являются антигены гистосовместимости (тканевой совместимости), которые кодируются генами, называемыми генами гистосовместимости. Хотя продукты этих генов названы антигенами, они проявляют свою антигенность только в том случае, когда распознаются системой не собственного, а генетически отличающегося организма, например, при аллотрансплантации органов. Ткани с идентичными антигенами называют гистосовместимыми; такие ткани не вызывают адаптивного иммунного ответа, ведущего к отторжению. Ткани со значительными антигенными различиями являются гистонесовместимыми; такие ткани вызывают адаптивный иммунный ответ, который приводит к отторжению трансплантата. Наибольшее количество трансплантационных антигенов содержится на лимфоцитах и на клетках кожи; в меньшей концентрации они имеются на поверхности клеток легких, печени, кишечника, сердца, сосудов; самое низкое их содержание − в тканях мозга. Отсутствуют они на эритроцитах и на трофобластах плаценты. Отсутствие молекул МНС на клетках трофобласта снижает опасность отторжения плода, экспрессирующего молекулы МНС отца, чужеродные для матери. Каждый человек наследует определенный набор генов HLA-системы, один и тот же на всю жизнь, у другого человека этот набор генов практически не повторяется. По этим генам полная идентичность может быть только у монозиготных близнецов. Совместимость органа между родителем и ребенком составляет 50%, а совместимость по HLA-генам между братьями и сестрами составляет 25%. Трансплантация между HLA-совместимыми братьями и сестрами или родителями и детьми может дать практически такие же хорошие результаты, как и пересадка между монозиготными близнецами. Во всех других случаях возникает иммунологический конфликт, то есть развивается реакция отторжения. . К сильным трансплантационным антигенам, вызывающим острую реакцию отторжения, относятся HLA-антигены локусов А и В, при этом гистосовместимость в большей степени определяется локусом В. На практике подбор считается оптимальным при несовместимости донора и реципиента только по одному сильному трансплантационному антигену. Так как при пересадке тканей или органов между генетически различными лицами практически всегда имеются различия по HLA-антигенам, то при трансплантации, как правило, необходимо применение иммуносупрессивной терапии, подавляющей иммунологическую реактивность реципиента. Таким образом, отторжение аллогенного трансплантата происходит вследствие того, что он несет антигены, отсутствующие у реципиента. Отторжение осуществляется, главным образом, с помощью клеточно-опосредованного адаптивного иммунного ответа реципиента на аллоантигены трансплантата. Эту реакцию отторжения можно назвать реакцией “хозяин против трансплантата” 11) Различные виды трансплантатов. Особенности формирования первичной и вторичной реакции отторжения. Аутотрансплантаты - собственные ткани реципиента. Использование таких трансплантатов не вызывает иммунного ответа донора.
Пересадка тканей или органов от одного индивидуума другому, генетически отличающемуся,вызывает реакцию отторжения пересаженного биологического материала. Время отторжения первичного трансплантата - около 14 дней. Вторичный трансплантат отторгается быстрее: приблизительно за 5-7 дней. Реакция включает три этапа. На этапе I происходит распознавание антигенов трансплантата предшественниками цитотоксических Т-лимфоцитов (пCD8) и предшественниками хелперных и воспалительных Т-клеток (ТНО). После распознавания клетки мигрируют в ближайшую (региональную) лимфоидную ткань.В периферической лимфоидной ткани развиваются основные события, приводящие к формированию эффекторов реакции отторжения (этап II). пCD8 трансформируются в эффекторные зрелые цитотоксические Т-клетки (CD8). Свободные трансплантационные антигены, поступающие в лимфоидную ткань, захватываются антигенпрезентирующими клетками (отмечены только макрофаги - МФ) и подключают к ответу как ТН1-, так и ТН2-клетки. При совместном участии антигенпрезентирующих клеток, В-клеток и ТН2 формируется гуморальный иммунный ответ, являющийся дополнительным звеном отторжения. Здесь же происходит сорбция секретируемых антител на поверхности натуральных киллеров (НК), а также активация макрофагов либо под воздействием цитокинов Т-клеток, либо в результате сорбции антител. Активируются также и НК-клетки под воздействием цитокинов Т-лимфоцитов.
12) Роль клеточных механизмов в отторжении трансплантата (Роль CD4 и CD8 субпопуляций Т-клеток в стадии отторжения, стадии отторжения). Иммунный ответ на трансплантированный орган состоит из клеточных (опосредованных лимфоцитами) и механизмов, опосредованных гуморальными антителами. Хотя также включены другие типы клеток, Т-клетки являются центральными для реакции отторжения трансплантата. Реакция оторжения состоит из стадии сенсибилизации и эффекторной стадии. На стадии сенсибилизации Т-клетки CD4 и CD8 по своим Т-клеточным рецепторам распознают антигены, экспрессированные на клетках трансплантанта, и в ответ пролиферируют.Для идентификации антигена необходимы два сигнала. Первый из них обеспечивается взаимодействием Т-клеточного рецептора с антигеном, представленным молекулами комплекса гистосовместимости, а второй — взаимодействием костимулирующего рецептора / лиганда на поверхности Т-клеток. На стадии сенсибилизации существуют так называемые прямые и косвенные пути, каждый из которых приводит к генерации различных комплексов всех специфических клонов Т-клеток. В прямом пути Т-клетки хозяина распознают интактные алломолекулы основного комплекса гистосовместимости на поверхности донорной или стимулирующей клетки. Т-клетки хозяина распознают донорскую ткань как чужую. На этот раз, вероятно, доминирующий путь, участвующий в раннем аллоиммунном ответе. Косвенным способом Т-клетки распознают обработанный аллоантиген, представленный в виде пептидов из отдельных антигенпрезентативных клеток. После трансплантации активируются различные Т-клетки и цитокины, такие как IL-2 и IFN-γ. Затем были выражены L-хемокины, IP-10 и MCP-1, что способствует интенсивной инфильтрации макрофагов аллотрансплантата. IL-6, TNF-α, индуцибельная синтаза оксида азота и факторы роста также играют определенную роль в этом процессе. Факторы роста, включая TGF-β и эндотелин, вызывают пролиферацию гладких мышц, интимное утолщение, интерстициальный фиброз и трансплантацию почек и гломерулосклероз. Эндотелиальные клетки, активированные цитокинами и макрофагами, полученными из Т-клеток, экспрессируют класс II основного комплекса гистосовместимости, молекул адгезии и костимулирующих молекул. Они могут представлять собой антиген и, таким образом, набирать больше Т-клеток, усиливая процесс отторжения. CD8-положительные Т-клетки опосредуют клеточно-опосредованные ответы цитотоксичности либо «летальным ударом», либо, наоборот, индукцией апоптоза. 13) Методы типирования антигенов гистосовместимости (МЛЦТ, СКЛ), принципы постановки. HLA типирование - исследование главного комплекса гистосовместимости человека - HLA комплекса. Это образование включает в себя область генов на 6-й хромосоме, которые кодируют HLA-антигены, участвующие в различных реакциях иммунного ответа. Задачи при HLA типировании могут стоять самые разные - биологическая идентификация (HLA-тип наследуется вместе с родительскими генами), определение предрасположенности к различным заболеваниям, подбор доноров для пересадки органов - при этом производится сравнение результатов HLA типирования тканей донора и реципиента. С помощью HLA типирования определяют, и насколько супруги сходны или различимы по антигенам тканевой совместимости, чтобы диагностировать случаи бесплодия. Для минимизации риска отторжения трансплантата перед трансплантацией проводят лабораторные тесты по фенотипированию МНС как донора, так и реципиента (перекрестная проба). Эти тесты часто называют тканевым типированием. Серологическое HLА-типирование потенциального донора и реципиента обычно производят с помощью микролимфоцитотоксического теста (МЛЦТ), постановка которого требует всего несколько часов. Этот тест основан на том, что антитела определенной стандартной сыворотки фиксируются на соответствующих HLА-антигенах лимфоцитов и вызывают комплементзависимый лизис последних. С помощью этого теста определяют так называемые SD-антигены (Serological Defined-серологически определяемые), к которым относятся антигены локусов HLА-А, В, С и DR. Для определения специфичностей антигенов локусов HLА-А, В, С и DR используется набор типирующих сывороток, лимфоциты исследуемого человека и комплемент. Типирующие сыворотки представляют собой набор стандартных сывороток, содержащих антитела против известных антигенов гистосовместимости. Каждая типирующая сыворотка специфична к одному определенному аллельному варианту антигенов HLА, то есть содержит антитела против одной определенной специфичности. Для проведения МЛЦТ: из периферической крови выделяют лимфоциты донора и реципиента; выделенные клетки распределяют в лунки микротитрационных планшетов с моноклональными антителами, специфичными к различным аллелям антигенов HLA; - после инкубации добавляется комплемент; результат реакции оценивается путем подсчета процента гибели клеток с помощью витальных красителей (трипановый синий или эозин), которые окрашивают только погибшие клетки. Если лейкоциты экспрессируют аллель HLA, к которому специфичны моноклональные антитела, находящиеся в лунках, то при добавлении комплемента клетки погибают, и эти погибшие клетки окрашиваются витальными красителями (трипановым синим или эозином). В реакции смешанной культуры лейкоцитов (СКЛ) лейкоциты от донора и реципиента в течение нескольких дней культивируются вместе. Донорские Т-клетки реагируют на аллоантигены МНС, экспрессируемые на клетках реципиента, стимулируются с последующей выработкой цитокинов и пролиферируют в присутствии данных антигенов.То же самое справедливо и для лейкоцитов реципиента, которые также будут пролиферировать в присутствии аллоантигенов на донорских клетках. тест СКЛ при определении гистосовместимости является высокочувствительным показателем уровня совместимости между донором и реципиентом, он является длительной процедурой и для его проведения необходимо нескольких дней, в то время как серологическое и молекулярное типирование занимает менее 1 сут. Таким образом, в то время как трансплантация клеток тканей и органов от живого донора может быть отложена до получения результатов СКЛ, такого времени может не хватить, когда органы получены от недавно умершего человека. Именно поэтому создаются так называемые банки органов, благодаря которым как только появляется необходимый орган, он становится доступным для наиболее подходящего реципиента. 14) Реакция «трансплантат против хозяина», ее профилактика. жүктеу/скачать 100,53 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|