СТ НАО 990240005606-001-2019 воды и вносят 1 мл твина-80. Тщательно перемешивают. Раствор пептона с твин-80
добавляют к вышеуказанной смеси. Доводят объем жидкости дистиллированной водой до
500 мл, затем гидролизованным молоком Богданова до 1000 мл; рН среды 6,2-6,6. Среду
фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки или флаконы и
стерилизуют в течение 20 мин при 0,05 МПА (режим № 2).
6.4.2.2 МРС-4 плотная питательная среда. Применяется для определения количества
живых микробных клеток лактококков. В отличие от среды МРС-1 содержит 2,5% агар-
агара, рН среды 6,2-6,6. Стерилизуют по режиму № 2.
6.4.2.3
МРС - плотная питательная среда для определения антагонистической
активности производственных штаммов и препарата.
6.4.2.4 Натуральное обезжиренное молоко доводят до кипения или до температуры
(90±2)
о
С на 15 минут, затем охлаждают до 48-50 єС заполнением рубашки реактора
холодной водой. Подщелачивают (20±2)% раствором едкого натрия до рН 8,0±0,2. рН
определяют потенциометрически (ЛПУ-1 или рН-340).
После установки рН к 1 л молока добавляют 1 г сухого порошка панкреатина с
ферментативной активностью 45 Е.Д. Порошок лучше предварительно развести в небольшом
количестве теплого молока. Через 10 мин добавляют 1% хлороформа или толуола. Реактор
выдерживают при температуре. 45-46єС в течение 72 часов (3 суток). В течение первых
часов следует несколько раз перемешать обезжиренное молоко, открывая при этом
воздушный фильтр (для удаления паров).
Через 72 часа гидролизат декантируют в бутыли и хранят в холодной камере. Обычно
рН среды не требует корректирования и равен 3,4-6,6.
Готовый гидролизат желтоватого цвета, прозрачный или слегка опалесцирущий.
Биохимические показатели гидролизата:
аминный азот (0,17±0,02)%
пептон (16±0,2)%
триптофан (0,04±0,002)%
6.4.2.5 Сухой препарат содержит культуральную бимассу и обезжиренное молоко в
качестве защитной среды
6.4.3 Проведение испытаний
Навеску препарата по 1 г из 3 вскрытых упаковок (всего 3г) суспендируют в 300 смі
стерильного 0,9%-ного раствора натрия хлорида, в результате чего в 1 см і суспензии
содержание сухого препарата равно 0,01 г. Оставляют на 4 ч при комнатной температуре,
встряхивая через 20-30 мин. Затем содержимое колбы тщательно перемешивают вручную в
течение 10 минут и приготавливают ряд последовательных 10-кратных разведений. Для
этого 1 смі приготовленной суспензии стерильной пипеткой переносят в пробирку с 9 смі
стерильного раствора натрия хлорида, получая разведение 10
-1
, затем из разведения 10
-1
и
переносят 1 смі взвеси во вторую пробирку, получая разведение 10
-2
. Операцию повторяют
до разведения 10
-7
. Для получения каждого последующего разведения используют
отдельную стерильную пипетку.
Сухой препарат заливают 0,85% раствором натрия хлорида. С учетом массы порошка
доводят объем растворителя до 10 мл (например, порошок массой 0,5 г - в 9,5 мл и т.д.). Это
первое разведение (10
-1
). Оставляют на 4 ч при комнатной температуре, встряхивая через 20-
30 мин. Затем содержимое колбы тщательно перемешивают вручную в течение 10 минут и
приготавливают ряд последовательных 10-кратных разведений. Из полученной взвеси в
пробирках готовят последовательные, десятикратные разведения до 10
-7
или до 10
-8
в 0,85%
растворе натрия хлорида, используя для каждого разведения отдельную пипетку
вместимость I мл.
Из полученных разведений 10
-6
; 10
-7
; или 10
-7
и 10
-8
высевают 0,1 мл микробной
суспензии (пипеткой вместимостью I мл) на две чашки Петри со средой МРС-4. Из двух