СТ НАО 990240005606-001-2019 Для проверки на патогенность смывы из чашек засевают на МПБ, МППБ и среду
Сабуро по 2 пробирки в соответствии с требованиями
ГОСТ 28085
.
Суточную культуру из МППБ вводят двум кроликам по 4 мл подкожно; 4 морским
свинкам, двум по 2 мл подкожно, а двум по 1,0 мл внутримышечно в обе задние лапки; а
также 5 белым мышкам по 0,5 мл подкожно.
Культуру из МПБ и среды Сабуро вводят белым мышам подкожно (по 5 мышек на
каждую среду).
Наблюдение за животными ведут в течение 10 дней. Все животные должны остаться
живыми.
При получении отрицательных результатов серию препарата проверяют на удвоенном
количестве образцов и животных. При повторении отрицательных результатов серию
бракуют.
При микроскопии взвеси препарата и в мазках, окрашенных по Грамму, должны
содержаться клетки, характерные для культуры бактерий
Lactobacillus helveticus 5-2M и
Lactobacillus brevis 8-6 М 6.7 Определение безвредности
6.7.1 Аппаратура, материалы, реактивы
иглы инъекционные с наплавленной оливой 1 – 1,5 мм – ГОСТ 25377;
шприц медицинский - ГОСТ 22967;
спирт этиловый – ГОСТ 5962;
вата медицинская – ГОСТ 5556;
мыши белые массой 18-20 г.
6.7.2 Подготовка к испытаниям
Навеску препарата предварительно растворяют стерильным 0,9% раствором хлорида
натрия из расчета 2,0 мл растворителя на один грамм препарата, взбалтывают.
6.7.3 Проведение испытания
Для проведения испытания отбирают пять белых мышей массой 18-20 г и вводят
однократно через рот по 0,5 смі приготовленной взвеси препарата. Препарат считают
безвредным, если все мыши остаются живыми и клинически здоровыми в течение 10 сут. В
случае гибели хотя бы одной мыши испытания повторяют на удвоенном их количестве. В
случае гибели животных при повторном испытании, серию препарата бракуют.
6.8 Определение антагонистической активности препарата
6.8.1 Аппаратура и материалы по 6.4.1; 6.4.2
6.8.2 Подготовка к испытанию
Флаконы открывают в стерильных условиях и сухую микробную массу растворяют
0,9 % раствором хлорида натрия из расчета 10 мл на 1 дозу препарата. После растворения 0,1
мл микробной взвеси переносят в пробирку со средой МРС-1 и инкубируют двое суток при
температуре 37 єС. Двухсуточную культуру высевают штрихом по диаметру чашки Петри со
средой МРС-5 петлей диаметром 3-4 мм. После 4-суточного инкубирования при 37
0
С на
чашки подсевают индикаторные культуры, предварительно выращенные в течение 6 часов на
мясо-пептонном бульоне (рН 7,2-7,4), Посев проводят петлей (диаметром 1,5 -2,0 мм)
штрихом в направлении от зоны роста исследуемой культуры, не касаясь ее и
перпендикулярно ей.
6.8.3. Обработка результатов
Учет результатов проводят через сутки инкубирования при 37 °С по величине зоны
отсутствия роста индикаторной культуры на 2,0 см и более характеризует высокую
антагонистическую активность.
Контролем роста тест-культуры служит их параллельный посев на чашки с той же
средой (МРС-5) без испытуемой культуры.
Годным считают серии препарата, которые со всеми тест-штаммами дают зону