4. Непрямая проба Кумбса как проба на совместимость
переливаемой крови.
Необходимое оснащение:
– пробирка № 1 высотой не менее 10 см с маркировкой, содер-
жащей сведения о доноре (фамилия, инициалы, групповая и резус-
принадлежность);
– пробирка № 2 высотой 3–4 см с маркировкой, содержащей све-
дения о больном (фамилия, инициалы, групповая и резус-прина-
длежность);
– лабораторная центрифуга;
– термостат 37° С;
– белые пластинки со смачиваемой поверхностью;
– изотонический раствор хлорида натрия;
– антиглобулиновая сыворотка;
– пастеровские пипетки.
Техника проведения реакции: через иглу устройства для перели-
вания кровь или эритроцитную массу донора из бутылки, предназна-
ченной для трансфузии, или из отрезка трубки контейнера набрать
в количестве 1–2 мл в пробирку № 1. Пробирку долить доверху изо-
тоническим раствором хлорида натрия, содержимое перемешать,
центрифугировать, отсосать отмывную жидкость. Такое отмывание
повторить дважды, каждый раз удаляя отмывную жид-кость. Со дна
пробирки № 1, содержащей отмытые эритроциты донора, очень
тонкой пастеровской пипеткой набрать маленькую каплю (0,01 мл)
эритроцитов и перенести ее в пробирку № 2. В пробирку № 2 к эрит-
роцитам донора добавить 3 капли сыворотки больного, пробирку
встряхнуть для перемешивания эритроцитов с сывороткой, после
чего поместить в термостат при 37° С на 45 мин. За это время изо-
иммунные антитела, если они имеются в сыворотке реципиента,
18
фиксируются на эритроцитах донора. После инкубации в пробирку
№ 2 добавить доверху изотонический раствор хлорида натрия, содер-
жимое пробирки перемешать, центрифугировать и удалить отмыв-
ную жидкость. Такое отмывание эритроцитов повторить 3–4 раза. К
осадку отмытых эритроцитов добавить 3–4 капли изотонического
раствора хлорида натрия для получения приблизительно 5% взвеси.
Одну каплю 5% взвеси эритроцитов перенести на белую пластинку,
добавить по одной капле антиглобулиновой сыворотки. Сыворотку
перемешать с эритроцитами и наблюдать результат реакции при по-
качивании пластинки в течение 20 мин. При несовместимости по
резус-фактору агглютинация обычно наступает в течение первой
минуты. Однако при низком титре резус-антител (или других анти-
тел) агглютинация может наступить позже.
Трактовка результатов: если наблюдается агглютинация эритро-
цитов (агглютинаты видны в виде комочков на просветленном или
полностью обесцвеченном фоне), это указывает на то, что кровь
донора несовместима с кровью реципиента и не может быть ему
перелита. Если взвесь эритроцитов осталась гомогенно окрашен-
ной, без признаков агглютинации, это значит, что кровь больного
не содержит неполных антител к эритроцитам донора в отношении
резус-фактора и других аллоантигенов, к которым могли образо-
ваться антитела неполной формы. Непрямая проба Кумбса является
чувствительной только в отношении неполных антител.
5. Универсальная проба на индивидуальную совместимость
крови донора и реципиента.
Проба на индивидуальную совместимость сыворотки реципи-
ента с эритроцитами предполагаемого донора является наиболее
надежным способом выявления антител, способных вызвать по-
вреждение перелитых эритроцитов и посттрансфузионные реакции
(гемолитические). Проведение такой пробы позволяет:
– определить АВ0-совместимость донора и реципиента;
– выявить практически все антитела в сыворотке реципиента,
направленные против эритроцитов донора.
Во всех случаях, кроме срочных трансфузий, проба проводится
в 2 этапа: первый — без использования антиглобулинового реаген-
та, второй — с антиглобулиновым реагентом или с использованием
19
раствора желатина. В случае использования желатина метод менее
чувствителен.
Первый этап: поместить 2 капли сыворотки реципиента в мар-
кированную пробирку, добавить 1 каплю 3% взвеси трижды отмы-
тых эритроцитов донора в изотоническом растворе хлорида натрия
(фиксация антител происходит лучше в растворе низкой ионной
силы — LISS, поэтому предпочтительнее взвесить эритроциты в
растворе LISS, обычно поставляемом изготовителем вместе с анти-
глобулиновым реагентом). Немедленно центрифугировать при
2000 об./мин в течение 20–30 с. Просмотреть супернатант на нали-
чие гемолиза, мягко покачивая пробирку отделить клеточный оса-
док от дна пробирки и определить наличие агглютинатов. Наличие
гемолиза и/или агглютинатов на этой стадии может означать несов-
местимость по системе АВ0, либо присутствие в сыворотке реци-
пиента полных холодовых антител не АВ0 специфичности (анти-S,
анти-Р1, анти-М, анти-N и др.).
Второй этап — проба с антиглобулиновым реагентом. Если
гемолиз отсутствовал, а после встряхивания пробирки эритро-
циты образовали гомогенную суспензию, следует инкубировать
пробирку в течение 30–45 мин (при использовании LISS время
инкубации составляет 10–15 мин) при 37° С. Центрифугировать
пробирку при 2000 об./мин в течение 20–30 с и просмотреть су-
пернатант на наличие гемолиза и агглютинатов. Наличие гемоли-
за и/или агглютинатов (после встряхивания пробирки) говорит
о присутствии у реципиента полных тепловых антител против
эритроцитов донора.
Если гемолиз и агглютинация отсутствуют, следует провести от-
мывание эритроцитов 3–4 раза большим объемом (не менее 5 мл) в
изотоническом растворе хлорида натрия (недостаточное отмывание
может привести к инактивации антиглобулинового реагента и лож-
ноотрицательному результату теста, поскольку сыворотка даже в
разведении 1:4000 инактивирует равный объем антиглобулиново-
го реагента). Добавить 1–2 капли антиглобулиновой сыворотки и
тщательно перемешать. Центрифугировать пробирку, как указано
выше, мягко разбить осадок и просмотреть пробирку на наличие
агглютинатов.
20
Оценка результатов: кровь донора считается совместимой, если
ни на одной стадии пробы на индивидуальную совместимость с
кровью реципиента не наблюдается ни гемолиза, ни агглютинации.
Агглютинация свидетельствует о наличии аллоантител в сыворотке
реципиента, специфичность которых может быть выявлена в спе-
циальной серологической лаборатории исследованием с панелью
типированных эритроцитов. Такие реципиенты нуждаются в спе-
циальном подборе донора.
Качество антиглобулинового реагента гарантируется изготови-
телем. Реагент с истекшим сроком годности или после повторного
замораживания (оттаивания) использованию не подлежит. С це-
лью контроля (если возникли сомнения в качестве реагента) сле-
дует провести антиглобулиновый тест с резус-положительными
эритроцитами, сенсибилизированными неполными анти-D анти-
телами.
Достарыңызбен бөлісу: |