3. ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Изучить закономерности обмена гемоглобина и его производных. Уметь определять общий билирубин и его фракции и применять полученные показатели в клинико-диагностической практике.
4. ЗАДАНия ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ ВО ВРЕМЯ ПОДГОТОВКИ И ПРОВЕДЕНИя ЗАНЯТИЯ 4.1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ
Хромопротеины: классификация, биологическая роль.
Гемоглобин: строение, свойства, биологическая роль. Типы гемоглобина. Аномальные формы гемоглобина при гемоглобинозах (гемоглобинопатии, талассемии). Производные гемоглобина.
Этапы синтеза гемоглобина, регуляция процесса.
Порфирины: структура, схема реакций биосинтеза протопорфирина IX и гема. Регуляция синтеза порфиринов.
Наследственные нарушения биосинтеза порфиринов. Типы порфирий.
Катаболизм гемоглобина (схема). Образование желчных пигментов. Роль печени в обмене желчных пигментов.
Нарушение обмена желчных пигментов.
Патобиохимия и диагностика различных видов желтух.
4.2. ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ, КОТОРЫЕ ВЫПОЛНЯЮТСЯ НА
ЗАНЯТИИ
Протокол № 5 Дата 1. Определение общего, прямого и непрямого билирубина. Принцип метода:
Диазореактив дает с прямым билирубином (билирубина моно- и диглюкурониды) розовую окраску. Интенсивность окраски раствора (азобилирубин) пропорциональна концентрации прямого билирубина и может быть определена фотоколориметрическим методом. Непрямой билирубин (комплекс билирубина с альбуминами плазмы крови) можно перевести в растворимое состояние добавлением к плазме кофеинового реактива, который повышает растворимость этого пигмента, и определить с помощью диазореакции.
Ход работы: В 2 пробирки внести по 0,5 мл плазмы крови, разбавленной в 2 раза изотоническим раствором NaCl. В первую пробирку (определение прямого билирубина) прибавить 1,75 мл 0.9% NаСl и 0,25 мл диазореактива Эрлиха.
Во вторую пробирку прибавить 1,75 мл кофеинового реактива и 0,25 мл диазореактива Ерлиха (определение общего билирубина). Обе пробирки встряхнуть.
Для определения прямого билирубина необходимо фотометрировать через пять минут после добавления диазосмеси, а для определения общего билирубина - через 20 минут.
Измерение оптической плотности каждой пробы проводят по сравнению с контрольной пробой, которую выдает старший лаборант. Фотометрируют в кюветах 5 мм при длине волны 540-560 нм (светло-зеленый светофильтр).
Содержание общего и прямого билирубина определяют по графику, умножив результаты на 2. Разность между общим и прямым билирубином - это непрямой билирубин плазмы крови.
В норме:
содержимое общего билирубина 3,5-20,5 мкмоль/л;
непрямого билирубина - <12 мкмоль/л,
прямого билирубина - < 7 мкмоль/л.
